載體介導的siRNA對LoVo細胞中VEGFR表達的抑制作用.pdf_第1頁
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1、目的：構建靶向血管內(nèi)皮生長因子受體3(VEGFR-3)基因的小干擾RNA(siRNA)表達載體(psiRNA-VEGFR-3)，轉(zhuǎn)染至人結腸癌細胞中，檢測這一表達載體是否能在人結腸癌細胞株LoVo細胞中引發(fā)RNAi效應，能否阻抑VEGFR-3基因表達，及阻抑VEGFR-3基因表達后腫瘤細胞生長和凋亡率變化等生物學效應的改變，探討VEGFR-3在腫瘤細胞生長中的作用，期望為結腸癌基因治療提供新的途徑。 方法：GenBank中查找V

2、EGFR-3基因全序列，作為靶基因，按照sirNA設計、合成三對VEGFR-3編碼基因的反向重復序列，中間間隔9個核苷酸序列，并設計、合成一對非特異性對比序列，退火形成短雙鏈RNA，通過定向克隆至線形載體pSUPER，構建siRNA真核表達載體，酶切鑒定表達載體，利用Lipofeetamine2000將構建的psiRNA-VEGFR-3載體轉(zhuǎn)入LoVo細胞中，應用半定量RT-PCR檢測基因轉(zhuǎn)染后各組細胞VEGFR-3 mRNA表達水平的

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