bFGF siRNA表達質粒對膠質瘤中STAT3基因抑制作用的研究.pdf

1、目的:研究堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)小分子干擾RNA（siRNA）表達質粒對膠質瘤細胞系U251中STAT3及cyclinD1和bcl-xl的抑制作用，探討膠質瘤基因治療的新途徑。
　　 方法:用優(yōu)選靶序列siRNA850構建siRNA表達質粒pGPU6/GFP/Neo-shFGF2，然后采用脂質體介導的方法轉染入膠質瘤細胞系U251細胞內，用MTT法觀察不同質粒用量即3ug、4ug和5ug，脂質體用量10ul，對膠質瘤

2、細胞系U251細胞的抑制作用，找出抑制效果最好的質粒用量。用最佳質粒用量分別檢測轉染后不同時間點即24小時、48小時、72小時和96小時的MTT吸收值，觀察細胞增值活性。用免疫組化定性(測定轉染后24h)及westernblot（測定轉染后24h、48h、72h三個時間點）相對定量的方法檢測轉染前后STAT3、cyclinD1和Bcl-xl蛋白表達的變化。
　　 結果:1.MTT法顯示脂質體用量10ul，bFGF siRNA質粒

3、用量4ug對U251細胞的抑制作用最好。轉染后24小時，正常對照組、陰性對照組、實驗組的MTT吸收值無顯著性差異。轉染后48小時和72小時，實驗組與正常對照組和陰性對照組相比，均具有顯著性差異，表明對細胞增殖具有顯著的抑制作用;轉染后96小時，實驗組與陰性對照組相比具有統(tǒng)計學意義，但與正常對照組相比，無統(tǒng)計學意義。
　　 2.免疫組化顯示:轉染后24小時實驗組STAT3、CyclinD1和Bcl-xl在膠質瘤細胞系U251中表達

4、的陽性率較正常對照組降低。轉染24小時后，正常對照組STAT3表達(+++)，陽性細胞率為46.27％，實驗組表達(+)，陽性細胞率為14.23％，陰性對照組表達(++)，陽性細胞率為28.39％;正常對照組Bcl-Xl表達(+++)，陽性細胞率為51.3％，實驗組表達(+)，陽性細胞率為10.56％，陰性對照組表達(++)，陽性細胞率為27.82％;正常對照組CyclinD1表達(+++)，陽性細胞率為48.79％，實驗組表達(+)，

5、陽性細胞率為8.89％，陰性對照組表達(++)，陽性細胞率為31.36％。
　　 3.western blot結果:用FlourchmeFC2軟件分析western凝膠圖像可以說明轉染后24h、48h、72h均顯示STAT3、CyclinD1和Bcl-xl的實驗組蛋白條帶的AVG值較正常對照組和陰性對照組降低，且質粒的抑制作用48小時最強，其次是72小時，最后是24小時。
　　 結論:用優(yōu)選靶序列siRNA850構建的s