6，8-二-三氟亞甲基-7-乙酰氧基白楊素在Caco-2細胞模型的跨膜轉運及首過糖基化速率研究.pdf

1、目的：通過比較白楊素（ChR）及其衍生物6,8-二-三氟甲基-7-乙酰氧基白楊素（dFMAChR）在人結腸腺癌（Caco-2）細胞模型的跨膜轉運及首過糖基化速率，為尋找具有良好的藥動學特性的活性新化學實體提供實驗依據。 方法：建立精確靈敏、重復性好的ChR及dFMAChR的高效液相（HPLC）檢測方法，并測定其理化性質；MTT法測定ChR和dFMAChR對Caco-2細胞的毒性作用。體外培養(yǎng) Caco-2細胞，用Transwel

2、l建立單層細胞模型；確定ChR和dFMAChR轉運的最佳Ph條件。評價時間、濃度對dFMAChR和ChR的雙向轉運的影響，HPLC檢測藥物含量，計算轉運速率及表觀滲透系數。評價時間對ChR和dFMAChR葡萄糖醛酸化產物形成的影響，用β-葡萄糖醛酸苷酶水解葡萄糖醛酸結合物，HPLC檢測，計算葡萄糖基化速率。 結果：50μmol/L的ChR和dFMAChR在Ph 7.4，37℃的PBS中孵育24h后，兩者的飽和溶解度分別是4.28

3、±0.56 μmol/L，2.05±0.44 μmol/L。隨著溶液Ph升高dFMAChR穩(wěn)定性（檢測的原藥量）較ChR的穩(wěn)定性顯著提高。MTT法測定結果表明，在一定濃度范圍內，ChR和dFMAChR對Caco-2細胞毒性作用較小，即使兩者濃度高達100μmol/L，受試物對Caco-2細胞的增殖活性無顯著抑制作用。Caco-2細胞培養(yǎng)21天后，成功建立細胞單層模型。隨著轉運介質Ph值升高，dFMAChR和ChR的轉運速率降低，但相同濃

4、度下dFMAChR的轉運速率顯著快與ChR的轉運速率。ChR和dFMAChR的轉運依賴于時間和濃度，幾乎呈線性關系。從Apiral（A，腸腔面）到Basolateral（B,基底面）的轉運占優(yōu)勢，但相差不大。而且，無論是從A-B側轉運還是從B-A側轉運dFMAChR較ChR轉運速率顯著提高。ChR和dFMAChR的葡萄糖醛酸化產物隨時間的增加而增加，dFMAChR較ChR的糖基化速率顯著降低。結束轉運時，均能在Transwell兩側檢測

5、到ChR和dFMAChR的葡萄糖醛酸化產物，而且腸腔側（A側）檢測代謝產物含量高于基底膜側（B側）。 結論：白楊素經選擇性引進三氟甲基和乙?；螅@得的衍生物dFMAChR較白楊素化學穩(wěn)定性提高，水溶性降低。在Caco-2模型中，dFMAChR和ChR均由被動擴散方式轉運，dFMAChR的轉運速率高于ChR，可能與其化學穩(wěn)定性提高有關。另外，dFMAChR葡萄糖醛酸化程度較ChR顯著降低說明其代謝穩(wěn)定性增加，首過代謝是白楊素吸收