高鹽負荷加速誘導的自發(fā)性高血壓大鼠靶器官損傷時間窗研究.pdf

1、目的：高鹽攝入是高血壓及其發(fā)生發(fā)展的重要環(huán)境因素之一，高鹽除直接升高血壓以外，還可獨立于血壓對心、腦、腎、大動脈等高血壓靶器官產(chǎn)生有害作用。自發(fā)性高血壓大鼠（Spontaneously Hypertensive Rats，SHR）是研究原發(fā)性高血壓及其干預實驗中最常用的動物模型之一，然而據(jù)文獻報道，SHR在15～20周齡開始出現(xiàn)左心室肥厚（Left Ventricular Hypertrophy，LVH），但只有在52至90周齡期間才會

2、出現(xiàn)明顯心臟功能障礙。故動物實驗中常采用高鹽負荷（給予高鹽飲食或高鹽飲水，以前者多見）的方法來加速SHR的靶器官損傷，但目前文獻中關(guān)于高鹽負荷干預SHR后出現(xiàn)明顯靶器官損傷的時間報道并不一致。本研究以SHR為研究對象，分別給予不同濃度鹽負荷飲食，動態(tài)觀察SHR的心臟、腎臟及主動脈等靶器官結(jié)構(gòu)和功能的變化，并與京都Wistar大鼠（Wistar Kyoto Rats，WKY）對照組進行比較，以期確定SHR接受高鹽負荷后出現(xiàn)明顯靶器官損傷的

3、時間窗，為后續(xù)進一步的的機制及干預研究提供參考依據(jù)。
　　 方法：以60只7周齡SHR為動物模型，經(jīng)適應性喂養(yǎng)1周后，將SHR隨機分為三個亞組，分別給予含0.5％NaCl（低鹽組），4.0％NaCl（中鹽組）和8.0％NaCl（高鹽組）的飼料進行不同濃度鹽負荷的干預，同時選取36只周齡、體重相當?shù)腤KY大鼠作為對照組。從8周齡開始，每兩周或四周采用標準尾部測壓法測定大鼠的無創(chuàng)血壓，每兩周收集各組大鼠的24小時尿液，利用ELISA

4、法測定24小時尿微量白蛋白水平，每四周采用二維超聲多普勒法，用12MHz超聲探頭經(jīng)胸部對各組大鼠心臟的結(jié)構(gòu)和功能進行動態(tài)分析，持續(xù)12周后，將大鼠麻醉，首先采用雙導管法測定大鼠主動脈脈搏波傳導速度（pulsewave velocity，PWV），隨后進行取材，將心臟組織切片行苦味酸-天狼猩紅染色，利用偏振光顯微鏡和Pixera Pro150ES數(shù)字CCD采集圖像后，然后采用ImagePro Plus4.5軟件進行分析，計算膠原容積分數(shù)（

5、Collagen Volume Fraction，CVF）和血管周膠原面積/血管腔面積（Perivascular Collagen Area to Luminal Area ratio，PVCA/LA），用以反映心臟間質(zhì)和血管周纖維環(huán)程度，此外，利用麥胚凝集素（WGA，F(xiàn)ITC Conjugate）和4'，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）免疫熒光染色法計算心肌細胞橫斷面積（Myocardial Cross-Sectional Are

6、a，MCSA）。
　　 結(jié)果：
　　 1.除WKY的低鹽組外，其余五組大鼠血壓均隨周齡進行性升高，以SHR的血壓升高尤為明顯，而高鹽組與中鹽組的血壓在各周齡相比均無明顯統(tǒng)計學差異。
　　 2.高鹽組和中鹽組的左心室結(jié)構(gòu)和功能均出現(xiàn)了明顯損傷，且高鹽組與中鹽組相比無顯著性差異，此外我們還發(fā)現(xiàn)，高鹽負荷后的8～12周可能是左心室由代償性肥厚進展為失代償（即心室擴張）的關(guān)鍵時間窗；另外心臟組織病理學結(jié)果顯示，高鹽組和中

7、鹽組SHR的心臟間質(zhì)和血管周圍膠原含量以及心肌細胞橫截面積明顯增加，提示心肌纖維化和心肌肥厚的形成，但是WKY的變化要小得多，高鹽組與中鹽組相比也無顯著性差異。
　　 3.我們的實驗結(jié)果顯示，24小時尿微量白蛋白水平與鹽負荷濃度是相關(guān)的，與血壓水平無明顯關(guān)系。此外，各組SHR在8周齡時的24小時尿微量白蛋白水平明顯高于WKY，提示SHR在8周齡已經(jīng)存在輕度腎臟損傷。
　　 4.高鹽組和中鹽組SHR均出現(xiàn)了明顯的動脈硬化，

8、但是WKY的變化不明顯，而且高鹽組和中鹽組相比無顯著性差異。
　　 結(jié)論：
　　 1.高鹽組和中鹽組的血壓、心臟結(jié)構(gòu)和功能以及動脈硬化程度均無顯著性差異；
　　 2.高鹽負荷后的8～12周可能是左心室由代償性肥厚進展為失代償（即心室擴張）的關(guān)鍵時間窗；
　　 3.高鹽組和中鹽組SHR的心臟膠原含量以及動脈硬化程度明顯增加，但WKY的變化較??；
　　 4.24小時尿微量白蛋白水平與鹽負荷的濃度直接相