轉(zhuǎn)錄因子Oct4及Nanong在人乳腺癌干細(xì)胞中的表達(dá)及意義.pdf

1、腫瘤干細(xì)胞理論認(rèn)為腫瘤是由腫瘤干細(xì)胞異常增殖、分化而形成,常規(guī)放化療僅能消滅增殖期的非致瘤性腫瘤細(xì)胞,使腫瘤縮小甚至消失,然而,腫瘤干細(xì)胞和普通干細(xì)胞一樣,對(duì)放化療等方法具有較高的抵抗能力,當(dāng)治療停止后,腫瘤干細(xì)胞可再次增殖形成腫瘤。干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子Oct4及Nanog參與胚胎干細(xì)胞和原始生殖細(xì)胞的自我更新,是維持細(xì)胞全能性所必須的轉(zhuǎn)錄因子,在分化或成熟的組織中其表達(dá)水平降低或消失。近來(lái)發(fā)現(xiàn)Oct4及Nanog在腫瘤組織中也有表達(dá),且表達(dá)

2、水平與腫瘤的惡性程度相關(guān)。這與腫瘤中存在腫瘤干細(xì)胞的理論相一致,其在腫瘤干細(xì)胞中的作用有待研究。目前已證實(shí)乳腺癌中存在乳腺癌干細(xì)胞,并且乳腺癌干細(xì)胞在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展中起著關(guān)鍵作用。本實(shí)驗(yàn)利用RNA干擾的方法研究轉(zhuǎn)錄因子Oct4及Nanog在乳腺癌干細(xì)胞中的作用。
　　 我們首先通過(guò)無(wú)血清培養(yǎng)法從乳腺癌MDAMB231細(xì)胞中分離出乳腺癌干細(xì)胞。通過(guò)研究其乳腺癌干細(xì)胞表面標(biāo)志、抗化療藥紫杉醇的能力及在小鼠體內(nèi)的致瘤能力,對(duì)其干細(xì)

3、胞特性進(jìn)行鑒定。其次,通過(guò)Real-time PCR及WestenBlot等方法檢測(cè)其Oct4及Nanog的表達(dá)情況。隨后,我們利用siRNA分別下調(diào)乳腺癌干細(xì)胞中Oct4及Nanog的表達(dá),并通過(guò)Real-Time PCR及Westen Blot等方法檢測(cè)干擾效果,探討Oct4與Nanog在乳腺癌干細(xì)胞中的相互作用,并利用CellTiter-Blue Cell Viability Assay檢測(cè)干擾后對(duì)乳腺癌干細(xì)胞抗化療藥能力的影響。

4、
　　 通過(guò)上述研究,我們發(fā)現(xiàn)在無(wú)血清培養(yǎng)基中存活下來(lái)的MDAMB231細(xì)胞比普通MDAMB231細(xì)胞具有較強(qiáng)的致瘤能力及抗化療藥紫杉醇的能力,具有乳腺癌干細(xì)胞的特性,下調(diào)乳腺癌干細(xì)胞中Oct4的表達(dá)會(huì)降低其N(xiāo)anog的表達(dá)水平,同樣,下調(diào)乳腺癌干細(xì)胞中Nanog的表達(dá)也會(huì)減少其Oct4的表達(dá)水平,Oct4及Nanog的表達(dá)量減少均會(huì)導(dǎo)致乳腺癌干細(xì)胞的抗化療藥能力下降。本研究表明,轉(zhuǎn)錄因子Oct4及Nanog在乳腺癌干細(xì)胞中發(fā)揮