RNA干擾HER-2-neu基因對子宮內膜癌Ishikawa細胞增殖及其對孕激素敏感性的影響.pdf

1、目的：觀察shRNA表達質粒靶向沉默HER—2/neu基因對Ishikawa子宮內膜癌細胞增殖及對孕激素敏感性的影響。 方法：針對HER—2/neu基因序列構建短發(fā)夾狀siRNA真核表達載體(pSilencer4.1—CMV HER—2/neu)，轉染子宮內膜癌細胞株Ishikawa，分別于轉染24、48、72小時后，采用Western Blot法檢測p185蛋白的表達，Annexin V試劑盒檢測細胞凋亡，于轉染72h流式細胞

2、術檢測細胞周期的變化；于轉染12h后各組分別加入不同濃度孕激素作用48h，用MTT法檢測不同濃度孕激素分別作用于未轉染及轉染后的細胞增殖率的改變。 結果：測序證實成功構建HER—2/neu的2個短發(fā)夾狀siRNA真核表達質粒，轉染Ishikawa細胞后，轉染了特異性HER—2/neu shRNA的細胞p185蛋白水平均明顯低于轉染無義對照序列的細胞；細胞凋亡分析顯示，HER—2/neu基因沉默的細胞凋亡率明顯增加(P<0.01)

3、；與非特異性對照組及空白對照組相比，轉染shRNA72h后處于G0/G1期細胞增多，同時S期的細胞比例減少；MTT分析顯示RNAi與孕激素聯(lián)合作用組細胞增殖率明顯低于非特異性干涉組及空白對照組(P<0.01)。 結論：靶向HER—2/neu基因的短發(fā)夾狀siRNA可明顯降低p185蛋白的表達、增加細胞的凋亡并阻滯細胞周期于G0/G1期；HER—2/neu基因沉默與孕激素聯(lián)合作用的Ishikawa子宮內膜癌細胞增殖明顯受抑制并且細