STK11互作蛋白LOH12CR1功能的初步研究.pdf

1、Peutz-Jephers綜合癥(Peutz-Jeghers syndrome，PJS)是以多發(fā)性錯構瘤樣胃腸道息肉和粘膜色素沉著為主要臨床表現(xiàn)，且具有高度腫瘤易感性的常染色體顯性遺傳性疾病，抑癌基因STK11(也稱之為LKB1)是PJS的致病基因。STK11的編碼產物是長為433aa的絲/蘇氨酸蛋白激酶STK11，在胞漿胞核均有分布。 互作蛋白的發(fā)現(xiàn)為了解STK11的功能及解釋PJS高度腫瘤易感機制起到了重要作用。STK11與

2、P53存在相互作用，STK11以依賴于p53的方式來促進細胞周期素依賴性激酶p21的表達從而實現(xiàn)其細胞周期阻滯作用，同時通過P53的介導，過表達的STK11還可以轉定位于線粒體膜，經線粒體途經誘導細胞凋亡二與STRAD、MO25結合形成異三聚體的STK11激酶活性明顯增強，磷酸化激活下游底物如AMPK促進分解代謝，或AMPK相關蛋白MARK3/PAR1A參與細胞極性調控網絡。陸續(xù)發(fā)現(xiàn)其他與STK11互作的蛋白質如Brg-1、LIP-1、

3、FLIP-1、AGS3等也同時提示STK11可能從多個路徑參與調節(jié)細胞生長凋亡、能量代謝和細胞極性形成等生理過程。 我們曾采用GST Pull down技術和免疫共沉淀實驗在L02細胞中篩選并驗證了STK11新的功能未知的互作蛋白LOH12CR1。進化上高度保守的LOH12CR1是否具有較為重要的功能是我們所關注的問題，因此我們在生物信息學分析的基礎上，利用EGFP分子標簽觀察LOH12CR1在細胞內的定位，同時利用Realti

4、me-PCR檢測LOH12CR1在多種細胞株中的表達水平，并進一步通過細胞生長曲線繪制和細胞克隆計數(shù)觀察了LOH12CR1過表達對細胞生長和增殖的影響。 研究發(fā)現(xiàn)：①LOH12CR1這個進化上高度保守的“孤兒”蛋白可能存在下列翻譯后修飾位點：LOH12CR1不屬于任一已知蛋白家族，其蛋白序列中不存在與已知的蛋白功能模序相匹配的結構域，但可能存在1個N端豆蔻?；稽c、2個N端糖基化位點、一個CK2磷酸化位點；②LOH12CR1主要

5、定位于胞漿：共聚焦顯微鏡下觀察分別過表達pEGFP-C2-LOH12CR1重組蛋白的L02(STK11陽性表達)、HeLa(STK11陰性表達)細胞，發(fā)現(xiàn)綠色熒光均主要呈粗斑點狀散布于胞漿之中，極少數(shù)可見定位于胞核內。兩種細胞中，外源性LOH12CR1的定位相同，提示STK11的內源性表達可能并不影響LOH12CR1的亞細胞定位；⑨LOH12CR1在多種腫瘤細胞中表達：Realtime-PCR檢測發(fā)現(xiàn)LOH12CR1在所選取的L02、C

6、OS7、Be17402、HMC、Huh-7、Hela、Hela-WT、HL60、HT-29、及HCT116細胞株中均有表達。LOH12CR1在HeLa細胞中的表達水平較在HeLa-STK11+中高出5.79倍(P<0.05)，這提示STK11的穩(wěn)定表達可能下調LOH12CR1的表達水平；④LOH12CR1具有抑制細胞生長和增殖的作用：過表達LOH12CR1的HeLa、HCT116細胞克隆形成率和生長活性均明顯降低，這提示LOH12CR1