RNA干擾沉默Cx43基因表達(dá)抑制VSMCs增殖和遷移的研究.pdf

1、研究背景:經(jīng)皮腔內(nèi)冠狀動(dòng)脈介入術(shù)(percutaneous transluminal coronaryintervention,PCI)是目前冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病的主要治療措施之一,且已發(fā)展成為一種較成熟的介入性治療手段,然而血管成形術(shù)后再狹窄(restenosis,RS)的高發(fā)生率嚴(yán)重影響了手術(shù)遠(yuǎn)期效果,至今還沒(méi)有很滿意的治療方法。探討RS的機(jī)制及其新型治療方法成為心血管藥理領(lǐng)域的一大熱點(diǎn)與難點(diǎn)。研究表明,縫隙連接(gap jun

2、ction,GJ)參與了血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth musclecells.VSMCs)間的信息傳遞及其增殖和遷移過(guò)程,而VSMCs的增殖和遷移是血管壁重構(gòu)發(fā)生再狹窄的重要因?yàn)橹?。我們假設(shè)縫隙連接蛋白重構(gòu)可能參與了血管重構(gòu)和再狹窄的病理過(guò)程。
　　 目的:本實(shí)驗(yàn)旨在觀察慢病毒介導(dǎo)的大鼠Cx43基因沉默后對(duì)體外培養(yǎng)VSMCs的Cx43 mRNA和蛋白的表達(dá)以及對(duì)10％FBS誘導(dǎo)的VSMCs增殖和遷移的影響,為

3、開(kāi)發(fā)新型載基因支架治療RS的臨床前研究奠定理論基礎(chǔ)。
　　 方法：觀察不同感染復(fù)數(shù)(MOI分別為0、50、100、150、200)的Cx43-RNAi-LV對(duì)10％FBS誘導(dǎo)的VSMCs增殖的影響,MTT比色法測(cè)定吸光度值(OD492),繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線；細(xì)胞劃痕法測(cè)定細(xì)胞遷移距離并計(jì)算細(xì)胞遷移抑制率；RT-PCR法測(cè)定Cx43 mRNA的表達(dá)；Western Blotting法檢測(cè)Cx43蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果：MT

4、T法結(jié)果顯示:與MOI0組比較,Cx43-RNAi-LV(MOI100)組48h時(shí)OD值顯著性降低(p<0.05)。時(shí)間點(diǎn)為48h、72h、96h時(shí),隨著MOI的增大,OD值的降低有極顯著性差異(p<0.01)。后續(xù)實(shí)驗(yàn)以MOI為100轉(zhuǎn)染VSMCs48h。而NC-GFP-LV感染組細(xì)胞OD值無(wú)顯著差異,表明Cx43-RNAi-LV對(duì)10％FBS誘導(dǎo)的VSMCs增殖具有明顯的抑制作用。
　　 細(xì)胞劃痕法顯示:與正常對(duì)照組比較,C

5、x43-RNAi-LV感染組細(xì)胞遷移抑制率為37.37％(P<0.01),而NC-GFP-LV感染組細(xì)胞遷移距離無(wú)顯著差異,結(jié)果表明Cx43-RNAi-LV對(duì)10％FBS誘導(dǎo)的VSMCs遷移具有抑制作用。
　　 RT-PCR和Western Blotting檢測(cè)結(jié)果均顯示:Cx43-RNAi-LV感染組Cx43mRNA及其蛋白表達(dá)量較NC-GFP-LV感染組和正常對(duì)照組明顯降低(P<0.01)。
　　 結(jié)論：①大鼠Cx4