鏡鯉肌肉品質(zhì)性狀SSR分析與HUFA合成關(guān)鍵酶基因克隆及表達.pdf

1、為了深入探討鯉肌肉品質(zhì)性狀改良和鯉的高不飽和脂肪酸(HUFA)合成代謝調(diào)控機制,本研究分析微衛(wèi)星標(biāo)記與鏡鯉肌肉脂肪和蛋白質(zhì)含量之間的相關(guān)性,找到了與這兩種性狀相關(guān)的優(yōu)勢基因型。使用RT-PCR和RACE方法克隆鏡鯉肝臟中高不飽和脂肪酸合成關(guān)鍵酶基因Δ6脂肪酸脫氫酶(Δ6FAD)基因和脂肪酸延長酶5(ELOVL5)基因,并對其組織表達特性進行了研究,這將有助于探明鯉HUFA合成代謝調(diào)控機制,研發(fā)提高鯉HUFA合成能力的方法,促進鯉魚配合飼

2、料的研究和應(yīng)用及其養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。
　　主要結(jié)果如下:
　　(1)利用233個微衛(wèi)星標(biāo)記檢測鏡鯉(Cyprinus carpio)一個家系的107尾個體的基因型,采用GLM方法對肌肉脂肪含量和蛋白質(zhì)含量進行單標(biāo)記回歸分析。Permutation檢驗結(jié)果顯示:有17個標(biāo)記分別與肌肉脂肪和蛋白質(zhì)含量具有顯著相關(guān)性(P<0.05),其中,有4個標(biāo)記(HLJ030、HLJ2560、HLJ3633和HLJ3554)與肌肉蛋白質(zhì)含量呈極顯

3、著相關(guān)(P<0.01),表明這些標(biāo)記與性狀間可能存在連鎖關(guān)系。
　　(2)獲得Δ6脂肪酸脫氫酶基因全長序列(KJ576791),其cDNA全長為1471bp,編碼444個氨基酸。氨基酸序列與已克隆的魚類Δ6或Δ5脂肪酸脫氫酶具有65％-91％相似性,且具有典型的脂肪酸去飽和酶的結(jié)構(gòu)特性具有典型的脂肪酸脫氫酶基因的特征結(jié)構(gòu)。
　　(3)獲得脂肪酸延長酶5基因全長序列(KF924199),其cDNA全長1121bp,編碼291個

4、氨基酸。氨基酸序列與已克隆的魚類脂肪酸延長酶5基因的氨基酸序列具有74％-93％同源性,且具有典型的脂肪酸延長酶的結(jié)構(gòu)特性。
　　(4)通過實時熒光定量PCR(RT-qPCR)檢測兩個基因在鏡鯉不同組織中的表達量,發(fā)現(xiàn)鏡鯉Δ6脂肪酸脫氫酶(Δ6FAD)基因在肝臟中表達最高,其次是背肌、腹肌和腦,在心、腎、腸等組織中表達水平很低或難以檢測到。鏡鯉脂肪酸延長酶5(ELOVL5)基因在鏡鯉肝臟中表達量最高,其次為腦,在背部肌肉中表達最低