簡介：分類號密級UDC編號學(xué)位論文亳州市手足口病流行特點及腸道病毒71型VP1基因特征分析ANALYSISOFEPIDEMICACTERISTICSOFHFMDENTEROVIRUSTYPE71VP1GENEACTERISTICSOFBOZHOUCITY姓名孫峰導(dǎo)師姓名導(dǎo)師姓名徐元宏徐元宏教授教授安徽醫(yī)安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院科大學(xué)第一附屬醫(yī)院申請學(xué)位級別申請學(xué)位級別碩士碩士專業(yè)名稱專業(yè)名稱臨床檢驗診斷學(xué)臨床檢驗診斷學(xué)提交論文日期提交論文日期2015年3月論文答辯日期論文答辯日期2015年5月學(xué)位授予單位學(xué)位授予單位安徽醫(yī)科大學(xué)安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)位授予日期學(xué)位授予日期2015年7月答辯委員會主席章堯評閱人潘世揚、胡龍華

簡介：中山大學(xué)博士學(xué)位論文重組腺病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)的骨髓間充質(zhì)細(xì)胞導(dǎo)向的CNTF基因靶向性治療多發(fā)性硬化的實驗研究姓名陸正齊申請學(xué)位級別博士專業(yè)神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師胡學(xué)強(qiáng)20070530中山大學(xué)博士學(xué)位論文重組腺病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)的骨髓問充質(zhì)細(xì)胞導(dǎo)向的CNTF基岡靶向性治療多發(fā)性硬化的實驗研究第二部分重組腺病毒載體ADCNTFIRESGFP對MSC表達(dá)一目的CNTF的影響本課題欲觀察重組腺病毒載體ADCNTFIRESGFP對MSC表達(dá)CNTF的影響。材料和方法先體外培養(yǎng)MSCS細(xì)胞，用流氏細(xì)胞儀測定MHCL，CDL3CD44和MHC2，CD45，CD34，鑒定MSCS細(xì)胞。并分三組，第一組對MSCS進(jìn)行DIL染色，第二組將1X108的ADGFP病毒轉(zhuǎn)染L106MSCS，MOI為1001病毒活性單位細(xì)胞，第三組將1LO8ADCNTFIRESGFP轉(zhuǎn)染MSCSL106，用流氏細(xì)胞儀測定ADGFP病毒轉(zhuǎn)染后的MSCS和ADCNTFIRESGFP轉(zhuǎn)染后的MSCS表達(dá)的MHCL，CDL3CD44和MHC2，CD45，CD34情況，鑒定MSCS細(xì)胞的活性有無改變；再觀察ADGFP轉(zhuǎn)染的MSCS和ADCNTFIRESGFP轉(zhuǎn)染的MSCS的熒光情況，并計算轉(zhuǎn)染率，用CNTF的ELISA試劑盒測定三組上清液中CNTF的濃度，觀察三組CNTF分泌情況。結(jié)果采用SPSS130統(tǒng)計分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。用單因素方差分析P005差異有顯著性。三結(jié)果1MSCS表達(dá)MHCL，CDL3，CD44不表達(dá)MHC2，CD45，CD34。ADGFP轉(zhuǎn)染后的MSCS和ADCNTFIRESGFP轉(zhuǎn)染后的MSCS表達(dá)MHCL，CDL3，CD44不表達(dá)MHC2，CD45，CD34，證實MSCS的活性沒有改變。2DIL染色的MSCS在倒置熒光顯微鏡發(fā)出強(qiáng)的紅色熒光，發(fā)光率在99％左右。ADGFP轉(zhuǎn)染的MSCS因GFP發(fā)出強(qiáng)的綠色熒光。ADCNTFIRESGFP轉(zhuǎn)染的MSCS因GFP在CNTF后面，發(fā)出較ADGFP稍弱的綠色熒光。兩者的轉(zhuǎn)染率在90％左右。3ELISA試劑盒的測定結(jié)果顯示，MSCADCNTFIRESGFP分泌的CNTF較IL

簡介：點擊查看更多腺病毒介導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子對大鼠擴(kuò)張后皮瓣存活的影響.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：背景及目的非酒精性脂肪性肝?。∟ONALCOHOLICFATTYLIVERDISEASENAFLD）是代謝綜合征在肝臟的表現(xiàn)，包括單純性脂肪肝（SIMPLESTEATOSIS），非酒精性脂肪性肝炎（NONALCOHOLICSTEATOHEPATITIS，NASH），以及NASH相關(guān)的肝纖維化肝硬化、肝癌。隨著生活水平的提高，NAFLD在發(fā)展中國家的發(fā)病率顯著上升，我國NAFLD患者數(shù)量在過去的10年增加了近一倍，部分地區(qū)的發(fā)病率已達(dá)四分之一。同時，我國是病毒性肝炎感染的高發(fā)地區(qū)，約有1億HBV感染者及4000萬HCV感染者，其中合并NAFLD的患者有逐年增加的趨勢，這一部分人群已經(jīng)引起了研究者們的注意。目前關(guān)于NAFLD合并病毒性肝炎的研究多集中在NAFLD合并慢性丙型肝炎CHRONICHEPATITISCCHCNAFLD可以增加CHC患者進(jìn)展為肝硬化和原發(fā)性肝細(xì)胞癌HEPATOCELLULARCARCINOMAHCC的風(fēng)險，并降低抗病毒治療的療效。但是，丙型肝炎病毒HEPATITISCVIRUSHCV本身具有致肝細(xì)胞脂肪變的作用，因此在NAFLD合并CHC患者中得到的結(jié)論可能并不能推而廣之。關(guān)于NAFLD對慢性乙型肝炎CHRONICHEPATITISBCHB的影響，目前的研究結(jié)果卻并不一致，與CHC中看到的現(xiàn)象也不相同。部分研究認(rèn)為，肝臟脂肪變對CHB具有保護(hù)作用在脂肪肝患者中，乙型肝炎病毒HEPATITISBVIRUSHBV載量更低，乙肝病毒表面抗原HEPATITISBSURFACEANTIGENHBSAG清除率更高。但另一方面，一些研究顯示，脂肪肝可能會增加CHB患者發(fā)展為肝硬化及HCC的風(fēng)險，降低恩替卡韋抗病毒治療的效果。還有一些研究認(rèn)為，脂肪肝對HBV病毒載量及干擾素抗病毒治療無影響。事實上，這方面的研究存在許多難點，可能是導(dǎo)致這些矛盾結(jié)論的原因。首先，研究中多用肝臟超聲診斷脂肪肝。肝臟超聲檢查僅能檢出肝內(nèi)脂肪沉積超過30％的中度脂肪肝，難以檢出輕度脂肪肝（肝臟內(nèi)脂肪沉積為5％30％），因此在分組時，可能將輕度脂肪肝患者作為無脂肪肝的對照。其次，在研究NAFLD合并CHB時，難以保證受試者在代謝、病毒、治療等多種因素上的一致性。第三，人群研究難以獲取肝組織觀察肝內(nèi)免疫、代謝等方面的改變。因此，NAFLD在慢性病毒性肝炎中的影響仍不明確。動物模型可以克服上述臨床研究中的不足，但目前尚缺乏NAFLD合并病毒性肝炎的動物模型。為了更好的研究NAFLD對慢性病毒性肝炎的影響，本研究的具體研究目標(biāo)如下1成功建立飲食誘導(dǎo)的NAFLD合并病毒性肝炎小鼠模型；2在飲食誘導(dǎo)的NAFLD合并病毒性肝炎小鼠模型中，動態(tài)觀察肝炎病毒的復(fù)制情況及肝組織損傷程度；3探討NAFLD影響病毒性肝炎病程的相關(guān)免疫學(xué)機(jī)制。方法1采用60％高脂飲食（HIGHFATTYDIETHFD）喂養(yǎng)C3HHEN小鼠12周，觀察小鼠一般狀態(tài)及生活習(xí)性改變，觀察體重、谷丙轉(zhuǎn)氨酶ALANINEAMINOTRANSFERASEALT、谷草轉(zhuǎn)氨酶（ASPARTATEAMINOTRANSFERASEAST）、甘油三酯TRIGLYCERIDETG、總膽固醇TOTALCHOLESTEROLTC、高密度脂蛋白HIGHDENSITYLIPOPROTEINHDL、低密度脂蛋白（LOWDENSITYLIPOPROTEINLDL、血糖（GLUCOSEGLU）、胰島素水平及穩(wěn)態(tài)模型胰島素抵抗指數(shù)（HOMEOSTASISMODELASSESSMENTINSULINRESISTANCEHOMAIR）的動態(tài)變化及肝臟組織學(xué)變化。23型鼠肝炎病毒（MURINEHEPATITISVIRUS3MHV3）腹腔注射感染NAFLD小鼠，觀察小鼠一般狀態(tài)及生存率；動態(tài)觀察小鼠感染后血清生化學(xué)變化及肝臟病理改變；逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈反應(yīng)（REVERSETRANIONPOLYMERASECHAINREACTIONRTPCR）檢測小鼠肝內(nèi)MHV3。3MHV3腹腔感染NAFLD小鼠及正常飲食（NMALDIETND）小鼠，比較兩組小鼠生存率；比較兩組小鼠各時間點血清生化學(xué)變化及肝組織病理改變；實時定量聚合酶鏈反應(yīng)REALTIMEPOLYMERASECHAINREACTIONREALTIMEPCR檢測并比較各時間點兩組小鼠肝內(nèi)MHV3復(fù)制情況。4流式細(xì)胞術(shù)檢測MHV3感染后各時間點小鼠肝內(nèi)CD3CD8CD69T細(xì)胞、CD3CD8PD1T細(xì)胞、CD4CD25FOXP3TREG細(xì)胞比例的變化，并比較兩組小鼠之間的差異；REALTIMEPCR檢測并比較兩組小鼠MHV3感染后各時間點肝內(nèi)IL1Β、IL6、IL10、IL17A、IL22、IL33、TNFΑ、FGL2的表達(dá)，并比較兩組小鼠之間的差異。結(jié)果1成功建立NAFLD小鼠模型。HFD飲食喂養(yǎng)12周，C3HHEN小鼠體型肥胖，皮毛油膩，不喜活動，體重明顯增加；外周血ALT及AST水平無顯著升高；TG、TC、HDL、LDL、GLU、胰島素水平及HOMAIR均顯著升高；小鼠肝臟體積增大，肝重高于ND組，邊緣圓鈍，色澤紅黃，表面光滑，有油膩感；肝組織切片HE染色及油紅O染色可見肝細(xì)胞內(nèi)大量脂滴形成。2成功建立飲食誘導(dǎo)的NAFLD合并病毒性肝炎小鼠模型。NAFLD小鼠感染MHV3病毒后，在312天內(nèi)出現(xiàn)死亡，死亡率約為20％；感染小鼠外周血ALT和AST水平顯著升高；感染小鼠肝臟蒼白，缺乏光澤，并可見彌漫分布的針尖樣出血點；HE染色除可見肝細(xì)胞內(nèi)脂滴形成，還可見肝細(xì)胞胞漿疏松、肝細(xì)胞壞死、淋巴細(xì)胞浸潤等表現(xiàn)；PCR可檢測到肝內(nèi)MHV3病毒復(fù)制。3NAFLD小鼠感染MHV3病毒后，生存率與對照組無差異；MHV3病毒復(fù)制高于對照組，于感染4天時有統(tǒng)計學(xué)差異（P0002）；ALT及AST升高幅度大于ND組；肝組織炎癥壞死程度交對照組嚴(yán)重。4NAFLD小鼠感染MHV3病毒后，肝內(nèi)IL1Β、IL6、IL10、IL17A、IL33、TNFΑ、FGL2表達(dá)水平上調(diào)，且上調(diào)幅度大于ND組小鼠，而IL22表達(dá)水平降低，且降低幅度大于對照組小鼠。5NAFLD小鼠感染MHV3病毒后，肝內(nèi)CD4CD25FOXP3TREG細(xì)胞比例降低，但感染第16天開始高于ND組小鼠；CD3CD8CD69T及CD3CD8PD1T細(xì)胞均出現(xiàn)升高，上升幅度大于ND組小鼠，且細(xì)胞比例回落后仍持續(xù)高于ND組小鼠。結(jié)論1本研究采用HFD喂養(yǎng)C3HHEN小鼠12周成功建立NAFLD小鼠模型，并在此基礎(chǔ)上采用MHV3病毒腹腔感染小鼠，成功建立NAFLD合并病毒性肝炎小鼠模型。為研究NAFLD對病毒性肝炎的影響提供了動物模型，開辟了新的研究途徑。2NAFLD可以加劇肝內(nèi)MHV3病毒復(fù)制，加重肝內(nèi)炎癥反應(yīng)。3NAFLD在病毒性肝炎感染早期可以促進(jìn)肝內(nèi)細(xì)胞因子的釋放，使CD3CD8CD69T比例增加，CD4CD25FOXP3TREG比例降低，可導(dǎo)致肝內(nèi)炎癥壞死加重的。而感染后期CD4CD25FOXP3TREG及CD3CD8PD1T細(xì)胞比例的增加，有可能阻礙病毒清除。

簡介：中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院碩士學(xué)位論文腦梗塞認(rèn)知功能損害的臨床研究姓名張云燕申請學(xué)位級別碩士專業(yè)衛(wèi)生毒理學(xué)指導(dǎo)教師何躍忠20070516軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院研究生學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明秉承軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶W(xué)風(fēng)和科研作風(fēng)，本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下獨立進(jìn)行的研究工作和取得的研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝之處外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得至奎匡堂型堂瞳或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。論文作者簽字J魚蘭鄉(xiāng)簽字日期』王年二三月』魚日軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院研究生學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解芏主匡堂盤堂瞳有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定。特授權(quán)至主匡堂盤堂瞳可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編以供查閱和借閱。同意將本學(xué)位論文的復(fù)印件和磁盤送交國家有關(guān)部門和機(jī)構(gòu)。保密學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書論文作者簽字I魚蘭簽字日期生年J生日指導(dǎo)教師簽字互受匠簽字日期J盟年』月上L日

簡介：分類號H301密級不保密UDC400學(xué)校代碼11065碩士專業(yè)學(xué)位論文基于認(rèn)知超載理論的反腐專題片永遠(yuǎn)在路上模擬口譯實踐報告基于認(rèn)知超載理論的反腐專題片永遠(yuǎn)在路上模擬口譯實踐報告AREPTONSIMULATEDINTERPRETATIONFTHEANTICRUPTIONDOCUMENTARYALWAYSONTHEROADFROMTHEPERSPECTIVEOFCOGNITIVEOVERLOADINGTHEY呂金燕指導(dǎo)教師張銘澗學(xué)位類別翻譯碩士專業(yè)領(lǐng)域英語口譯答辯日期2017年6月5日AREPTONSIMULATEDINTERPRETATIONFTHEANTICRUPTIONDOCUMENTARYALWAYSONTHEROADFROMTHEPERSPECTIVEOFCOGNITIVEOVERLOADINGTHEYBYLVJINYANSUPERVISEDBYPROFESSZHANGMINGJIANATHESISSUBMITTEDTOTHECOLLEGEOFFEIGNLANGUAGESQINGDAOUNIVERSITYINPARTIALFULFILLMENTOFTHEREQUIREMENTSFTHEDEGREEOFMTIAPRIL2017

簡介：檢測HBV感染后慢性乙型肝炎、肝炎后肝硬化及肝癌患者外周血淋巴細(xì)胞HLAⅠ、HLAⅡ類分子表達(dá)，建立檢測相應(yīng)患者淋巴細(xì)胞內(nèi)HLAAMRNA方法；應(yīng)用人IL2刺激患者淋巴細(xì)胞并進(jìn)行LDH釋放試驗；探討慢性乙型肝炎、肝炎后肝硬化、肝癌患者外周血淋巴細(xì)胞HLAⅠ、HLAⅡ類抗原分子在宿主細(xì)胞免疫狀態(tài)中的作用，對患者細(xì)胞免疫功能紊亂機(jī)制提供新的思路。方法1、流式細(xì)胞術(shù)檢測外周血淋巴細(xì)胞表面HLAⅠ、Ⅱ類分子淋巴細(xì)胞抗體的標(biāo)記取四支試管，標(biāo)記為HLAⅠCTR、HLAⅡCTR、HLAI、HLAⅡ；取同型對照液IGGLFITC10U1分別加入HLAⅠCTR、HLAⅡCTR管中，分別取10ULHLAABCFITC、HLAⅡFITC加入HLAI、HLAⅡ管中；各管中加入100UL抗凝全血。以標(biāo)準(zhǔn)微球調(diào)整儀器，以HLACTR管做陰性對照。在前散射和測散射DOTPLOT二維圖中，劃出淋巴細(xì)胞區(qū)，收集10個細(xì)胞，然后對淋巴細(xì)胞作FITC熒光強(qiáng)度檢測，熒光強(qiáng)度以對數(shù)放大，光反射數(shù)據(jù)存軟盤，全部數(shù)據(jù)用CELLQUESTPLOT軟件進(jìn)行單色熒光參數(shù)獲取及分析。2、RTPCR檢測外周血淋巴細(xì)胞HLAAMRNA含量根據(jù)GENBANK中公布的HLAA基因序列，選取基因非多態(tài)區(qū)域外顯子4，5的部分堿基，設(shè)計表達(dá)HLAA基因位點的上下游引物，分別標(biāo)記為P1，P2，外周血淋巴細(xì)胞PBL的提?。惶崛〉腞NA與不同的引物組合置于RTPCR反應(yīng)體系中擴(kuò)增，以539BP的ΒACTIN作為內(nèi)參照，擴(kuò)增產(chǎn)物在2％瓊脂糖凝膠上電泳，篩選與預(yù)期片段相吻合的特異性引物。將上述PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳，以15％瓊脂糖凝膠，電壓120V，然后于凝膠成像分析系統(tǒng)上掃描，電泳結(jié)果通過BSCAN軟件分析，計算相對灰度值。3、LAK細(xì)胞殺傷活性測定無菌制備人外周血淋巴細(xì)胞；將收取的淋巴細(xì)胞用完全培養(yǎng)液稀釋至濃度為110個L。在37℃，5％CO培養(yǎng)箱中培養(yǎng)五天，于第二、四天添加完全培養(yǎng)液，觀察細(xì)胞生長情況。按CYTOTOX96NONRADIOACTIVECYTOTOXICITYASSAY試劑盒操作指南選擇最佳靶細(xì)胞數(shù)0510ML。用CM調(diào)整效應(yīng)細(xì)胞一淋巴細(xì)胞的濃度，以效應(yīng)細(xì)胞和靶細(xì)胞按20L比例混合加入96孔板，每個試驗設(shè)四個副孔，同時設(shè)效應(yīng)細(xì)胞和靶細(xì)胞自發(fā)釋放孔，靶細(xì)胞最大釋放孔，培養(yǎng)液對照孔，將細(xì)胞培養(yǎng)板移入CO恒溫培養(yǎng)箱，在37℃，5％CO濃度和飽和濕度的條件下培養(yǎng)4H后，離心1000RPM，4MIN，取上清50ΜL，用多孔加樣板轉(zhuǎn)移至96孔培養(yǎng)板中，在每個孔中加入50ΜLSUBSTRACTBUFFER避光室溫30MIN后，每孔加入50Μ1STOPSOLUTION在酶聯(lián)檢測儀上，選擇492NM檢測波長，645NM參考波長，以培養(yǎng)液對照孔調(diào)零，測定各孔吸光度A，計算LAK細(xì)胞活性。結(jié)果1、外周血淋巴細(xì)胞HLAI類分子平均熒光強(qiáng)度在慢性乙型肝炎33580、肝炎后肝硬化30978、肝癌患者11404與正常對照組56508均有顯著性差異P005。2、HLAII類分子表達(dá)率在慢性乙型肝炎為3828％、肝炎后肝硬化4221％、肝癌患者5275％，其中肝硬化組和肝癌組與正常對照組3250％有顯著性差異P005。外周血淋巴細(xì)胞HLAII類分子平均熒光強(qiáng)度在慢性乙肝、肝硬化、肝癌患者分別為660、7736、8896，與正常對照組6039無顯著性差異P005。3、HLAAMRNA在慢性乙型肝炎，肝硬化，肝癌患者中表達(dá)明顯低于正常對照組PTH或B細(xì)胞活化增強(qiáng)。4、外周血淋巴細(xì)胞體外誘導(dǎo)培養(yǎng)并檢測殺傷活性反映了宿主的細(xì)胞免疫功能，乙肝病毒感染后隨病情發(fā)展其淋巴細(xì)胞殺傷活性逐漸降低，并與淋巴細(xì)胞表面HLAI類抗原的平均熒光強(qiáng)度及HLAAMRNA含量的降低密切相關(guān)，以肝癌患者降低最為顯著。

簡介：第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文腺病毒介導(dǎo)的A20基因?qū)Χ伱?xì)胞保護(hù)作用的實驗研究姓名袁偉申請學(xué)位級別博士專業(yè)耳鼻咽喉科學(xué)指導(dǎo)教師張學(xué)淵20080501第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文因；同時現(xiàn)代社會、現(xiàn)代戰(zhàn)爭中電磁輻射尤其是高頻電磁輻射也是威脅人類健康的重要原因，因此本實驗選用這兩個損傷模型來進(jìn)行研究。通過研究初步明確鋅指蛋白A20對內(nèi)耳毛細(xì)胞的保護(hù)作用及其分子機(jī)制，為改善和修復(fù)受損的聽功能提供了理論依據(jù)?；谝陨戏治?，本研究首先建立了慶大霉素、高功率微波HPM致毛細(xì)胞損傷模型，觀察了A20在毛細(xì)胞正常、損傷條件下的表達(dá)規(guī)律，然后制備純化A20重組腺病毒表達(dá)載體PADEASYL／A20，觀察其在慶大霉素、HPM兩種損傷條件下對毛細(xì)胞的保護(hù)作用，并對其可能的機(jī)制進(jìn)行了探討。二、研究方法和結(jié)果1。HPM損傷毛細(xì)胞模型的建立將豚鼠置于反射系數(shù)近似為零的微波暗室內(nèi)進(jìn)行輻照，輻照劑量分別為30W／CM2、65W／CM2、90W／CM2，輻照時間20MIN，輻照后3H、6H、12H三個時相點觀察。結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同功率的輻照對豚鼠的神經(jīng)行為、體溫產(chǎn)生程度不一的影響，說明HPM可致豚鼠熱效應(yīng)損傷；ABR閾值測定顯示功率65W／CM2輻照6H后出現(xiàn)顯著性差異；光鏡、電鏡觀察65W／CM26H后出現(xiàn)形態(tài)學(xué)改變，毛細(xì)胞損傷數(shù)目較輻照前有差異，尤其是內(nèi)毛細(xì)胞損傷較大，細(xì)胞間出現(xiàn)許多球形物質(zhì)。這部分實驗說明HPM可以造成毛細(xì)胞損傷，65W／CM26H可以作為損傷觀察的研究劑量。2慶大霉素?fù)p傷毛細(xì)胞模型的建立給予慶大霉素120MG／KG腹腔注射，連續(xù)10天，通過ABR、光鏡、電鏡觀察發(fā)現(xiàn)慶大霉素功能上可以造成聽力下降，形態(tài)上可以造成毛細(xì)胞損傷，其損傷主要表現(xiàn)為外毛細(xì)胞，第一排外毛細(xì)胞的損傷較第二、三排重。3鋅指蛋白A20在豚鼠耳蝸毛細(xì)胞的表達(dá)研究通過耳蝸冰凍切片、A20原位雜交顯示正常情況下A20在體內(nèi)沉默表達(dá)，HPM、慶大霉素?fù)p傷后3H即出現(xiàn)表達(dá)，但6H后表達(dá)即減弱，12H后表達(dá)基本消失。說明體內(nèi)毛細(xì)胞存在A20基因，其在損傷條件下出現(xiàn)短暫表達(dá)。4PADEASY一1／20腺病毒的制備及其在體對毛細(xì)胞作用的表達(dá)通過酶切連接的方式將PCAGGSFLAGMA20質(zhì)粒的表達(dá)框連／入PADTRACKCMV穿梭載體，后者和ADEASY1在大腸桿菌中進(jìn)行同源重組，隨后轉(zhuǎn)染293細(xì)胞進(jìn)行病毒顆粒包裝。經(jīng)單、雙酶切及9PCR鑒定正確，大量擴(kuò)增病毒后，通過GFP報告基因確定病毒滴度為510PFU／ML。5PADEEAYL／A20重組腺病毒對毛細(xì)胞的保護(hù)作用研究通過耳蝸冰凍切片及免疫組化觀察，PADEEAYL／A20可以成功感染毛細(xì)胞；我們把研究對象按毛細(xì)胞損傷模型分為慶大霉素和HPM兩個大組，每組又分為5個實驗組，分別為正常對照組、

簡介：研究背景和目的糖尿病腎病DN是糖尿病全身性微血管并發(fā)癥之一也是導(dǎo)致終末期腎病的主要因素在高血糖條件下腎小球系膜區(qū)細(xì)胞外基質(zhì)ECM成分合成和分解代謝的紊亂直接導(dǎo)致了糖尿病腎病的發(fā)生和發(fā)展眾多研究表明過度表達(dá)的轉(zhuǎn)化生長因子ΒTGFΒ的活性介導(dǎo)了高血糖對腎臟的作用且可能是DN發(fā)展的主要決定因素在高血糖環(huán)境中抑制或下調(diào)TGFΒ信號的治療策略提供了一個抑制DN發(fā)生、發(fā)展的方法可溶性TGFΒⅡ型受體STΒRⅡ為TGFΒⅡ型受體胞外段能與TGFΒRⅡ競爭性結(jié)合TGΒ阻斷其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路從而抑制TGFΒ的生物學(xué)活性改善腎功能為更好地揭示在高血糖環(huán)境中應(yīng)用STBRⅡ?qū)GFΒ活性、腎小管間質(zhì)細(xì)胞增殖、細(xì)胞外基質(zhì)積聚及組織纖維化的抑制作用并探討利用STBRⅡ基因轉(zhuǎn)染防治DN的可能性本實驗構(gòu)建了STΒRⅡ重組腺病毒載體為進(jìn)一步的研究奠定基礎(chǔ)實驗設(shè)計和方法以姚航平研究員提供的STΒRⅡ質(zhì)粒為模板以PLATINUM酶擴(kuò)增含SALⅠXHOⅠ酶切位點的STΒRⅡ基因序列然后與TA質(zhì)粒連接后進(jìn)行鑒定通過SALⅠ和XHOⅠ雙酶切TASTΒRⅡ質(zhì)粒和PSI空載體腺病毒穿梭載體純化、回收后由T4DNA連接酶連接過夜并轉(zhuǎn)化入DH5Α感受態(tài)細(xì)菌中37‘C孵育過夜通過PCR和雙酶切鑒定挑取陽性克隆PSISTΒRⅡ?qū)⒄_質(zhì)粒用PMEⅠ酶切線性化后割膠純化回收采用電轉(zhuǎn)化的方法將含STΒRⅡ的穿梭載體轉(zhuǎn)入BJ5183AD1感受態(tài)細(xì)菌中涂板卡那霉素抗性后37℃孵育過夜挑取克隆擴(kuò)增抽提質(zhì)粒并經(jīng)PCR、酶切鑒定擴(kuò)增鑒定正確的腺病毒載體質(zhì)粒用PACⅠ酶切純化后應(yīng)用她S轉(zhuǎn)染試劑盒將質(zhì)粒轉(zhuǎn)入50﹪7096融合的AD293細(xì)胞中當(dāng)出現(xiàn)細(xì)胞病變效應(yīng)時收集細(xì)胞及培養(yǎng)上清70℃37℃反復(fù)凍融3次劇烈振蕩后離心收集上清70℃?zhèn)溆糜迷《旧锨謇^續(xù)感染AD293細(xì)胞以形成第二代病毒并觀察熒光細(xì)胞數(shù)進(jìn)行WESTERNBLOT檢測和重組蛋白對TGFΒ1的拮抗活性的檢測實驗結(jié)果1、獲得人STΒRⅡ基因片段及TASTΒRⅡ質(zhì)粒利用PLATIHUM酶擴(kuò)增出含SALⅠXHOⅠ酶切位點的STΒRⅡ序列與TA質(zhì)粒連接后轉(zhuǎn)化入DH5D獲得TASTΒRⅡ質(zhì)粒PCR和酶切產(chǎn)物于12﹪瓊脂糖凝膠電泳顯示片段在500BP左右測序結(jié)果表明序列正確2、成功構(gòu)建PSCIRESHRGFP1STΒRⅡ以下簡稱PSISTΒRⅡ穿梭載體質(zhì)粒雙酶切后的STΒRⅡ片段和PSI進(jìn)行連接獲得PSISTΒRⅡ經(jīng)PCR和雙酶切后電泳顯示有500BP左右的條帶3、成功構(gòu)建人STΒRⅡ重組腺病毒質(zhì)粒ADSTΒRⅡPSISTΒRⅡ經(jīng)電轉(zhuǎn)化入BJ5183AD1細(xì)菌中后獲得ADSTΒRⅡ質(zhì)粒經(jīng)PCR和雙酶切后電泳顯示有500BP左右的條帶4、重組腺病毒質(zhì)粒在AD293細(xì)胞中包裝及第二代病毒感染結(jié)果重組腺病毒質(zhì)粒用MBS轉(zhuǎn)染試劑盒將其轉(zhuǎn)入AD293細(xì)胞中至細(xì)胞培養(yǎng)第13天90﹪的AD293細(xì)胞出現(xiàn)病變效應(yīng)收集細(xì)胞及培養(yǎng)上清70℃37℃反復(fù)凍融、振蕩、離心后取上清感染AD293細(xì)胞在熒光倒置顯微鏡下觀察有無熒光細(xì)胞并再次收集細(xì)胞與病毒出現(xiàn)熒光細(xì)胞、WESTERNBLOT檢測出現(xiàn)特異性條帶和重組蛋白拮抗TGFΒ1對MVLLU細(xì)胞的生長抑制作用證明包裝病毒為有活性的病毒結(jié)論1、成功構(gòu)建了表達(dá)STΒRⅡ的重組腺病毒載體ADSTΒRⅡ2、表達(dá)的STΒRⅡ能阻斷TGFΒ1對MVLLU細(xì)胞的增殖抑制作用

簡介：浙江理工大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明我恪守學(xué)術(shù)道德，崇尚嚴(yán)謹(jǐn)學(xué)風(fēng)。所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已明確注明和引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品及成果的內(nèi)容。論文為本人親自撰寫，我對所寫的內(nèi)容負(fù)責(zé)，并完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名彬日期加，廬年≥月歲日曲弘理乒土學(xué)碩士學(xué)位論文通過DNASHUFFLING方法靶向乳腺癌細(xì)胞的腺相關(guān)病毒作者姓名嚴(yán)巧靈學(xué)科專業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)老師錢其軍教授所在學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院提交日期2012年3月中國杭州

簡介：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)（北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院）博士學(xué)位論文重組腺相關(guān)病毒介導(dǎo)的抗表皮生長因子受體單鏈可變區(qū)抗體對胰腺癌的基因治療姓名萬世奇申請學(xué)位級別博士專業(yè)臨床醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師趙玉沛張?zhí)?0080501SCFVSINGLECHAINVARIABLEFRAGMENT單鏈可變區(qū)抗體SDSSODIUMDODECYLSULFATE十二烷基磺酸鈉WST8WATERSOLUBLETETRAZOLIUM8可溶性噻唑鹽3

簡介：風(fēng)疹病毒（RUBELLAVIRUS，RV）是披膜病毒科風(fēng)疹病毒屬的唯一成員，人類是RV的唯一自然宿主。RV自然感染僅引起輕微的臨床癥狀，許多感染是無癥狀的亞臨床感染。一般于感染后16～20天內(nèi)出現(xiàn)皮疹，首先于面部出現(xiàn)，然后擴(kuò)散到軀干及四肢，其余癥狀還包括低熱、淋巴結(jié)腫大和咽痛。RV感染的并發(fā)癥以關(guān)節(jié)炎和關(guān)節(jié)痛最為常見，而且多發(fā)生于婦女。RV引起的主要問題是它的致畸性，即母親孕期感染RV會導(dǎo)致胎兒發(fā)生先天性風(fēng)疹綜合征（CONGENITALRUBELLASYNDROME，CRS）。CRS的臨床表現(xiàn)多種多樣，其中耳聾最為常見，還包括心臟疾病、精神發(fā)育遲滯和眼部疾患如白內(nèi)障和青光眼。妊娠期間母親感染RV越早，胎兒損害越嚴(yán)重。成熟的RV病毒顆粒是直徑為60NM的球形，核心是衣殼蛋白和單股正鏈基因組40SRNA組成的核衣殼，其外包繞脂質(zhì)雙層膜，膜上是長度為5～6NM的刺突由糖蛋白E2和E1組成。衣殼蛋白（CAPSIDPROTEIN，CP）是非糖基化的磷酸蛋白，靠二硫鍵形成同源二聚體。CP富含脯氨酸和精氨酸，與RV基因組RNA的結(jié)合有關(guān)。包膜糖蛋白E1和E2都是Ⅰ型膜糖蛋白，在病毒表面以異二聚體的形式存在。E1和E2都含有一段跨膜區(qū)（TM），長度分別為22和39個氨基酸。在E2中，TM之后是一段帶正電荷的七氨基酸序列和E1的20個氨基酸信號肽。E1和E2都富含半胱氨酸殘基，E1胞外功能區(qū)的20個半胱氨酸都形成二硫鍵，E2總共含有14個半胱氨酸殘基。E1有3個N聯(lián)糖基化位點，E2的N聯(lián)糖基化位點數(shù)目在不同的毒株間有差別，除N聯(lián)糖基化位點外，E2還含有O聯(lián)糖基化位點。E1和E2的功能研究較為廣泛，單克隆抗體研究發(fā)現(xiàn)E1至少含有6個不重復(fù)的抗原位點，與血凝和中和活性有關(guān)。E1還與病毒和細(xì)胞的吸附有關(guān)，是主要的表面蛋白。E2的功能研究顯得較為困難，因為它與E1結(jié)合后，幾乎不暴露在細(xì)胞表面，也就無法用單克隆抗體識別其抗原位點。但是，E2也含有部分血凝表位和中和表位，還有株特異性表位。細(xì)胞融合是包括RV在內(nèi)的許多有膜病毒侵入細(xì)胞、復(fù)制、釋放、傳播、致病的重要生物過程，也是細(xì)胞間信息傳遞的重要步驟。RV入侵細(xì)胞的途徑還沒有弄清楚，但是有證據(jù)表明是通過內(nèi)吞途徑進(jìn)入細(xì)胞。KATOW和SUGIURA發(fā)現(xiàn)PH在60以下時，E1和E2會發(fā)生構(gòu)象改變，這種改變有利于病毒包膜與內(nèi)含體膜的融合。若能弄清RV引起細(xì)胞融合的機(jī)制，從而改變RV的基因組，改變它的表達(dá)產(chǎn)物和生物學(xué)活性，就可以消除或降低RV的致畸性；也可以通過改變其侵入細(xì)胞或復(fù)制的特性來消除或減少胎兒感染的危險性；還可以為研制更安全有效的RV新型基因工程疫苗（基因缺失活疫苗、蛋白工程疫苗等）和特異性抗病毒的多肽類藥物奠定基礎(chǔ)。細(xì)胞融合由位于細(xì)胞表面的蛋白引起，因此細(xì)胞融合功能的檢測需要所研究的蛋白能夠在細(xì)胞表面表達(dá)。RVE2的信號肽在病毒結(jié)構(gòu)蛋白的加工及轉(zhuǎn)運過程中發(fā)揮重要作用，為了使所表達(dá)蛋白能夠在細(xì)胞內(nèi)正確加工及順利轉(zhuǎn)運至細(xì)胞表面，本研究構(gòu)建了重組質(zhì)粒PBSKSPE2E1，即將E2的信號肽序列、E2和E1的全基因序列克隆到載體PBLUEⅡSK的ECⅠ和XBAⅠ酶切位點之間。然后利用定點突變和同源重組的方法，構(gòu)建一系列突變體，GIEMSA染色和指示基因法檢測它們的細(xì)胞融合活性變化，流式細(xì)胞術(shù)（FACS）檢測蛋白在細(xì)胞表面表達(dá)效率，WESTERNBLOT檢測總表達(dá)量的改變，血吸附實驗檢測受體識別活性，分析突變位點對RV包膜糖蛋白細(xì)胞融合活性的影響，以確定具有細(xì)胞融合活性的位點。本研究還構(gòu)建了RVCP的重組載體PBSKC，并檢測CP對包膜糖蛋白細(xì)胞融合活性的影響。一、E1胞外功能區(qū)二硫鍵對RV細(xì)胞融合活性的影響RVE1包膜糖蛋白胞外功能區(qū)含有20個半胱氨酸殘基，而且都形成分子內(nèi)二硫鍵。本研究利用定點突變和同源重組相結(jié)合的方法，將RVJR23株E1蛋白胞外功能區(qū)的20個半胱氨酸中的11個突變?yōu)槠渌被?，?gòu)建了11個突變體CYS2、CYS3、CYS4、CYS5、CYS6、CYS8、CYS9、CYS12、CYS13、CYS17和CYS20，每個突變體去除E1的1個二硫鍵，檢測單個二硫鍵的消失對E1細(xì)胞融合活性的影響。二、E2中半胱氨酸對RV細(xì)胞融合活性的影響RV包膜糖蛋白E2中含有14個半胱氨酸，其中12個位于胞外功能區(qū)，1個位于跨膜區(qū)，1個位于胞質(zhì)區(qū)。本研究利用定點突變和體內(nèi)同源重組的方法，用突變的寡核苷酸為引物，構(gòu)建了14個E2的半胱氨酸突變體，每個突變體去除一個半胱氨酸，這些突變體分別為C69T、C82S、C91S、C124G、C132A、C139P、C152G、C157R、C172A、C196G、C207G、C219T、C255W和C259G。三、E1關(guān)鍵氨基酸突變體對細(xì)胞融合活性的影響E1胞外功能區(qū)的半胱氨酸突變分析顯示，第3、4和13位半胱氨酸突變之后，在細(xì)胞表面表達(dá)量與野毒株相比沒有降低，但是卻檢測不到融合活性，這3個半胱氨酸所形成的二硫鍵集中在E1的213～285位氨基酸之間，而這一段區(qū)域富含RV中和表位和血凝抑制表位，具有較重要的生物學(xué)活性，我們在此區(qū)域選擇了一些保守的或結(jié)構(gòu)上比較特殊的氨基酸，構(gòu)建了12個突變體H226Q、H238Q、R252S、P253T、R254Q、R256T、L257T、D259G、D261G、P263A、R266Q和P269S。四、衣殼蛋白CP對RV包膜糖蛋白細(xì)胞融合活性的影響RV衣殼蛋白CP在病毒復(fù)制、組裝及感染過程中都有作用，本研究檢測其對包膜糖蛋白的細(xì)胞融合活性的影響。RVJR23株感染BHK21細(xì)胞6天后提取病毒RNA，利用上游引物C1和下游引物C2反轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增C基因，引物中分別含有ECⅠ和SACⅠ酶切位點，擴(kuò)增的片斷酶切后，與經(jīng)相同酶切的載體PBLUEⅡSK片斷連接，測序證實成功構(gòu)建重組載體PBSKC。將PBSKC單獨轉(zhuǎn)染至BHK21細(xì)胞中，間接免疫熒光（IFA）檢測表達(dá)蛋白活性，結(jié)果在核周區(qū)可見到較強(qiáng)的熒光。將PBSKC與RV糖蛋白重組質(zhì)粒PBSKSPE2E1共同轉(zhuǎn)染BHK21細(xì)胞，GIEMSA染色發(fā)現(xiàn)細(xì)胞幾乎全部發(fā)生融合，與單獨轉(zhuǎn)染PBSKSPE2E1的細(xì)胞相比，細(xì)胞融合灶數(shù)量增多而且每個融合灶的細(xì)胞核數(shù)量增加，用指示基因法定量細(xì)胞融合顯示共轉(zhuǎn)染引起的細(xì)胞融合為糖蛋白單獨轉(zhuǎn)染的137％?？梢奀P可以促進(jìn)RV包膜糖蛋白的細(xì)胞融合活性。從本實驗結(jié)果可得出結(jié)論RV包膜糖蛋白E1胞外功能區(qū)的10個二硫鍵都是維持E1細(xì)胞融合活性不可缺少的，其中C（5）C（8）影響E1和E2的相互作用。RV包膜糖蛋白E2序列中的14個半胱氨酸中，胞外區(qū)有1個半胱氨酸及胞質(zhì)區(qū)的唯一1個半胱氨酸對E1的細(xì)胞融合活性沒有影響，其余12個都對E1的細(xì)胞融合功能有重要作用，它們可能通過二硫鍵的形成間接對其產(chǎn)生影響。RVE1的213～285AA，區(qū)域含有一些重要的細(xì)胞融合活性位點，是維持RV融合活性的關(guān)鍵氨基酸，如H238、P253、L257、D259G、D261、R266和P269。成功構(gòu)建了RVCP的重組載體，并在BHK21細(xì)胞中成功表達(dá)出CP，表達(dá)產(chǎn)物具有良好的生物學(xué)活性，能夠促進(jìn)酸性條件下RV包膜糖蛋白的細(xì)胞融合活性。本實驗為闡明RV引起細(xì)胞融合的分子機(jī)制、包膜糖蛋白的結(jié)構(gòu)與功能研究奠定了堅實的基礎(chǔ)，也可以為RV致畸機(jī)制的研究提供幫助。

簡介：點擊查看更多滅活輪狀病毒疫苗與滅活脊髓灰質(zhì)炎病毒疫苗聯(lián)合使用免疫效果評價.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：研究目的1了解廣州醫(yī)科大學(xué)生自殺意念現(xiàn)況；2分析比較應(yīng)用不同篩查工具得出的大學(xué)生自殺意念率；3分析自殺意念大學(xué)生的心理特點；4探討生活意義感、認(rèn)知態(tài)度、自殺態(tài)度、絕望感、一般自我效能感及社會環(huán)境及人口統(tǒng)計學(xué)因素在自殺意念發(fā)生中的作用及相互作用的機(jī)制，為大學(xué)生自殺高危人群的篩查提供科學(xué)依據(jù)。研究對象與方法在文獻(xiàn)分析和檔案研究的基礎(chǔ)上，廣泛征求專家及被試的意見，初步建立調(diào)查表。隨機(jī)抽取175名本科生進(jìn)行預(yù)調(diào)查，同時對10名大學(xué)生進(jìn)行訪談，再次征求專家及專業(yè)老師的意見，修改完善調(diào)查表。采取整群抽樣的方法，對某醫(yī)科大學(xué)在校的臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)各個年級學(xué)生進(jìn)行調(diào)查，共750人。問卷填寫完整并合格有效者共725人，有效率為966％。有效樣本的平均年齡2044±166歲，其中男生337人4650％，女生388人5350％。以自編基本情況問卷、貝克絕望量表、功能失調(diào)性態(tài)度問卷、生活目的問卷、一般自我效能感量表、自殺態(tài)度問卷評估自殺意念危險因素，自殺意念的有無以“你曾有過不如死了為好的愿望嗎”、“想輕生”、“想結(jié)束自己的生命”、自殺意念與行為問卷等作為篩查標(biāo)準(zhǔn)，由心理學(xué)專業(yè)人員進(jìn)行團(tuán)體測試，測試前用統(tǒng)一指導(dǎo)語詳細(xì)說明測試的目的和方法以及保密原則，答卷現(xiàn)場收回。用FOXPRO60建立數(shù)據(jù)庫，錄入數(shù)據(jù)，統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS115，統(tǒng)計方法包括描述性分析、T檢驗、卡方檢驗、LOGISTIC回歸分析、因子分析、信度分析等。結(jié)果1大學(xué)生自殺意念的篩查1本研究結(jié)果表明醫(yī)學(xué)生的自殺意念率為226％，23％的大學(xué)生曾采取過結(jié)束自己生命的行為。在有自殺意念的大學(xué)生中，171％求助過心理咨詢。2不同自殺意念篩查條目得出的自殺意念率有所不同?！跋虢Y(jié)束自己的生命”、“想輕生”篩查出的自殺意念率分別為80％、61％；最近1個月自殺意念率為86％，過去1年自殺意念率為196％，終生自殺意念率為297％，其中“僅僅有過短暫的想法”者占252％，制定過自殺計劃的學(xué)生占29％，曾嘗試過自殺者占16％。2自殺意念危險因素1性別、年級、專業(yè)滿意度、生活環(huán)境滿意度、學(xué)習(xí)壓力、就業(yè)壓力、主觀幸福感、人生觀、消極感受的體驗、對將來的感覺不同的大學(xué)生，其自殺意念率具有顯著性差異P＜001。2自殺意念大學(xué)生生活意義感總分低于無自殺意念大學(xué)生，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義P＜001。有自殺意念的大學(xué)生對自殺行為及安樂死持肯定或理解的態(tài)度者顯著多于無自殺意念大學(xué)生P＜001，對自殺者的態(tài)度和對自殺者家屬的態(tài)度總體上以肯定和理解居多，差異無統(tǒng)計學(xué)意義P＞005。3自殺意念大學(xué)生功能失調(diào)性態(tài)度各因子得分均顯著高于無自殺意念大學(xué)生的得分P＜005。自殺意念大學(xué)生的一般自我效能感的得分顯著低于無自殺意念大學(xué)生的得分P＜001。4有無自殺意念大學(xué)生的絕望感總分分別為759±381和479±320，具有顯著性差異P＜001。5根據(jù)專業(yè)知識及單因素分析的結(jié)果，篩選有意義因素為自變量，以自殺意念有無為因變量，選取Α005為檢驗水平，以LR后退法進(jìn)行21非條件二分類LOGISTIC回歸分析，結(jié)果顯示，進(jìn)入回歸方程的變量有學(xué)習(xí)壓力、學(xué)習(xí)成績、消極感受、絕望感、完美化、自主性態(tài)度、生活意義感、對自殺性質(zhì)的認(rèn)識。結(jié)論1醫(yī)科大學(xué)生的自殺意念率相對較高，有自殺意念的大學(xué)生少數(shù)求助過心理咨詢。2不同自殺意念篩查方法所得出的自殺意念率差別較大，自殺意念的界定和篩查方法仍須進(jìn)一步統(tǒng)一規(guī)范，大學(xué)生自殺高危人群的篩查方法仍須進(jìn)一步的研究。3高年級、女生、對專業(yè)和生活環(huán)境感到不滿意，學(xué)習(xí)壓力和就業(yè)壓力較大的學(xué)生自殺意念率相對較高，是干預(yù)工作的重點人群。4有自殺意念的大學(xué)生具有以下心理特點生活意義感較低，存在更多的認(rèn)知歪曲，對自殺行為及安樂死多持肯定或接受的態(tài)度，消極感受相對較多，一般自我效能感較低等。這些特點是識別自殺意念高危人群的重要線索。5自殺意念的發(fā)生是多種內(nèi)外因素共同作用的結(jié)果，本研究提出的自殺認(rèn)知閾限過程模型，可在一定程度上解釋多種因素的共同存在和作用下自殺意念的形成和發(fā)展過程，為自殺高危人群的篩查和干預(yù)提供了一定的依據(jù)。但該模型仍很不成熟須進(jìn)一步通過實證研究加以檢驗和修正。

簡介：廣西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文三株新城疫病毒抗人喉癌作用的比較研究姓名姜艷華申請學(xué)位級別碩士專業(yè)微生物學(xué)指導(dǎo)教師樊曉暉20090501三株新城疫病毒抗人喉癌作用的比較研究2006級碩士研究生學(xué)位論文凝效價／11024后，調(diào)整病毒濃度至LXL08PFU／ML，80。C冰箱保存?zhèn)溆?。常?guī)方法培養(yǎng)非洲綠猴腎細(xì)胞VEROE6、人喉癌HEP2細(xì)胞和人喉部正常組織細(xì)胞。將3株NDV病毒接種人喉癌HEP2細(xì)胞進(jìn)行選擇性擴(kuò)增，并用VEROE6細(xì)胞進(jìn)行蝕斑純化。得到純化病毒后再次擴(kuò)增，檢測其HA效價，并用MTR法檢測3株病毒對人喉癌HEP2細(xì)胞及人喉部正常組織細(xì)胞的殺傷作用。將處于對數(shù)生長期的HEP2細(xì)胞用含O25％胰酶和002％EDTA的消化液消化，收集并調(diào)整細(xì)胞密度為5X107個／ML的細(xì)胞懸液備用。每只裸鼠取1個注射點，用上述細(xì)胞懸液02ML／只注射于裸鼠皮下，接種后每天觀察有無腫瘤形成及注射點有無破潰紅腫，當(dāng)腫瘤長徑和短徑均達(dá)5MM后進(jìn)行隨機(jī)分組。通過醛化紅細(xì)胞法收集尿囊液中的病毒顆粒，PBS稀釋至LXL07PML作為NDV注射液，實驗組每只裸鼠瘤內(nèi)注射01ML。按規(guī)定時間測量腫瘤體積大小及裸鼠體重，繪制腫瘤生長曲線。NDV注射6周后處死裸鼠，秤量瘤塊和脾臟重量，計算抑瘤率和脾臟指數(shù)，進(jìn)行毒性評價。腫瘤組織用10％的福爾馬林溶液固定，進(jìn)行HE染色，評價移植瘤細(xì)胞在光學(xué)顯微鏡下的病理變化；通過電鏡觀察移植瘤細(xì)胞的病理變化；通過流式細(xì)胞儀檢測移植瘤細(xì)胞的凋亡情況；通過免疫組化SP兩步法檢測移植瘤中BAX和BCL2蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果本研究選用的3株NDV在體外均能在人喉癌HEP2細(xì)胞中復(fù)制增殖，均能殺傷HEP2細(xì)胞，而且殺傷效應(yīng)與病毒的作用劑量及作用時間成正比。在采用MTT法檢測3株NDV對人喉癌HEP2細(xì)胞及人喉部正常組織細(xì)胞的殺傷作用實驗中，3株NDV殺傷腫瘤細(xì)胞作用均較強(qiáng)。當(dāng)病毒稀釋度為LXL0。時，NDV作用細(xì)胞60H后NDVD817株、NDV7793株和NDVLASOTA