簡介：●●後旦大擎碩士研究生論文ALS患者認(rèn)知功能損害及T影響因素的研究ASTUDYOFFEATURESANDRELATEDFACTORSOFCOGNITIVEFUNCTK。AMYOTROPHICLATERALSCLEROSISUNCTIONINATERALCLEROSIS培養(yǎng)單位復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院專業(yè)姓名神經(jīng)病學(xué)裴曉思學(xué)號052105309學(xué)位導(dǎo)師導(dǎo)師組成員碩士洪震朱國行喬凱教授教授副教授◆◆目錄常用神經(jīng)心理測驗中英文對照表．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3中文摘要．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5英文摘要．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7前言．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9翮看．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9第一部分．J．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．11資料與方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．11結(jié)果．．．．．．．．．．．．?．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15討論．．．．．．?．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17第二部分．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20資料與方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20結(jié)果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23討論．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28第三部分．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31資料與方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31結(jié)果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32討論．．一．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．34參考文獻．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．36綜述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．39致謝．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．51

簡介：慢病毒介導(dǎo)的突變型DMDNK對乳腺癌細胞的殺傷作用THEKILLINGOFBREASTCANCERCELLBYLENTIVIRALCONSTRUCTSCONTAININGTHEMULTISUBSTRATEDEOXYRIBONUCLEOSIDEKINASEOFDROSOPHILAMELANOGASTERSUICIDEGENE導(dǎo)一級學(xué)科壁疸2E銎論文課題起止時間2QQ生旦二2Q生墨旦中國醫(yī)科大學(xué)遼寧2012年2月目錄一、摘要中文論文摘要1英文論文摘要3二、英文縮略語5三、論文前言6月U罱材料與方法7結(jié)果附論文圖片11討論14結(jié)論15參考文獻16四、附錄綜述19在學(xué)期間科研成績34致謝35個人簡介36

簡介：研究目的1描述老年臥床患者日常生活能力、社會活動、認(rèn)知和并發(fā)癥的發(fā)生狀況。2明確臥床時間與老年臥床患者自理能力、社會活動、認(rèn)知和并發(fā)癥的關(guān)系。3探討老年臥床患者臥床分級程度與自理能力、社會活動、認(rèn)知和并發(fā)癥的關(guān)系。對象與方法對象成都市5所有老年科、干部科的醫(yī)院的老年住院臥床患者，抽取持續(xù)臥床時間大于1月的患者進行調(diào)查研究。方法通過查閱文獻資料、專家評價及預(yù)調(diào)查修訂老年臥床休息調(diào)查表；調(diào)查表包括一般人口學(xué)特征、臥床相關(guān)特征、并發(fā)癥及社會活動量表、LAWTON和BRODY制定的日常生活能力量表、認(rèn)知能力量表。以上量表曾經(jīng)用于老年人及臥床相關(guān)研究，有較好的信度和效度。本研究采用描述一相關(guān)性研究，抽樣方法因受患者來源限制等因素制約，采用方便抽樣法。對臥床時間大于1月的151位老年患者進行自理能力、社會活動、認(rèn)知及并發(fā)癥調(diào)查。研究步驟對自理能力、社會活動、認(rèn)知的調(diào)查表的表面效度和重測信度的測評；面對面發(fā)放問卷；數(shù)據(jù)收集和處理；采用SPSS100進行統(tǒng)計分析。結(jié)果1老年臥床患者日常生活能力低下、社會活動缺乏、認(rèn)知障礙且并發(fā)癥較多。2老年患者持續(xù)臥床的時間不同其日常生活能力、社會活動、認(rèn)知、并發(fā)癥的差異老年患者臥床時間不同日常生活能力之間有差異P0001，臥床時間越長患者的日常生活能力障礙越明顯；臥床時間不同的患者的社會活動之間存在差異P00001，臥床時間越長患者的社會活動缺乏越明顯；臥床時間不同的老年患者認(rèn)知之間有差異P00001，臥床時間越長患者的認(rèn)知障礙越明顯。臥床時間不同的老年患者之間并發(fā)癥的發(fā)生有差異P00001，臥床時間越長患者的并發(fā)癥越多。3臥床時間與自理能力、社會活動、認(rèn)知、并發(fā)癥的關(guān)系臥床時間與日常生活能力評分呈正相關(guān)關(guān)系，有統(tǒng)計學(xué)意義R0340，P00001，即隨著臥床時間增長，日常生活功能障礙加重；臥床時間與社會活動評分呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，有統(tǒng)計學(xué)意義R0348，P00001，即隨著臥床時間增長，社會活動缺乏；臥床時間與認(rèn)知評分呈正相關(guān)關(guān)系，有統(tǒng)計學(xué)意義R0496，P00001，即隨著臥床時間增加，認(rèn)知障礙明顯；臥床時間與并發(fā)癥發(fā)生呈正相關(guān)關(guān)系，有統(tǒng)計學(xué)意義R0741，P00001，即隨著臥床時間增加，并發(fā)癥發(fā)生增加。4臥床分級本研究納入室內(nèi)生活需人扶持且大部分時間臥床及全天臥床兩級與自理能力、社會活動、認(rèn)知、并發(fā)癥的關(guān)系臥床分級大部分時間臥床及全天臥床與日常生活能力正相關(guān)，有統(tǒng)計學(xué)意義R0355，P0001即全天臥床較大部分時間臥床，自理能力評分高，自理障礙增加；臥床分級與社會活動為負(fù)相關(guān)，有統(tǒng)計學(xué)意義R0282，P00001，即全天臥床較大部分時間臥床，社會活動評分降低，社會活動障礙明顯；臥床分級與認(rèn)知正相關(guān)，有統(tǒng)計學(xué)意義R0296，P00001，即全天臥床較大部分時間臥床，認(rèn)知評分高，認(rèn)知功能障礙；臥床分級與并發(fā)癥之間正相關(guān)，有統(tǒng)計學(xué)意義R0186，P0022，即全天臥床較大部分時間臥床，并發(fā)癥發(fā)生增加。結(jié)論1結(jié)論和建議1老年臥床患者處于日常生活能力低下、社會活動缺乏、認(rèn)知障礙和并發(fā)癥較多的狀況。社會、家庭、醫(yī)護人員應(yīng)該給予他們更多關(guān)注。2持續(xù)臥床時間不同的患者其社會活動、日常生活能力、認(rèn)知和并發(fā)癥發(fā)生有明顯差異。3隨著老年人臥床時間的延長，存在日常生活能力降低、社會活動減少、認(rèn)知障礙和并發(fā)癥發(fā)生增加等特點，應(yīng)盡量減少臥床時間，改善其日常生活能力、社會活動及認(rèn)知，減少并發(fā)癥。4不同的臥床分級室內(nèi)生活需人扶持大部分時間臥床與全天床上生活與日常生活能力、社會活動、認(rèn)知、并發(fā)癥之間存在相關(guān)關(guān)系，即全天臥床較大部分時間臥床，有日常生活能力降低、社會活動能力降低、認(rèn)知障礙及并發(fā)癥增加等特點。應(yīng)該盡量減少患者每日的臥床時間。2應(yīng)用意義1為臨床醫(yī)護人員及患者的家人認(rèn)識到臥床患者存在日常生活能力低下、社會活動缺乏、認(rèn)知障礙和并發(fā)癥較多的狀況，使他們重視對老年臥床患者日常生活的護理、對其社會活動的促進、認(rèn)知狀況的評估、預(yù)防并發(fā)癥的發(fā)生提供依據(jù)。2為臨床工作中縮短老年患者持續(xù)臥床時間，將持續(xù)臥床變?yōu)殚g斷臥床以至應(yīng)該活動的時間不再臥床提供參考。3為臨床工作中減少患者每日的臥床時間，變?nèi)炫P床為部分時間臥床提供參考。

簡介：登革病毒（DENV）是一種蟲媒病毒，主要是通過白紋伊蚊和埃及伊蚊進行傳播，每年約有5000萬528億人口受到感染。DENV感染可以引起登革熱（DF）和危及生命的登革出血熱（DHF）及登革休克綜合征DSS，其中DHFDSS是重癥的登革病毒感染，其主要的特征之一是血漿滲漏。目前普遍認(rèn)為DHFDSS的發(fā)病機制主要包括病毒毒力因素，抗體依賴性感染增強效應(yīng)（ADE），宿主因素，交叉反應(yīng)性T細胞介導(dǎo)的免疫病理損傷以及細胞因子風(fēng)暴等。眾多發(fā)病機制的提出主要是因為模型的不同，目前小鼠、人血管內(nèi)皮細胞主要以人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVECS）作為研究DENV感染發(fā)病機制的主要模型，但小鼠模型的運用并不能完全模擬人類的感染情況，細胞模型則因作用因素單一也不能確切的反映感染癥狀。近年來研究發(fā)現(xiàn)組織基底硬度是影響細胞功能的主要因素之一，正常生理條件下血管基底膜及下層基質(zhì)的彈性硬度值影響了多種與血管內(nèi)皮細胞生存、復(fù)制、遷徙和維持穩(wěn)態(tài)的重要生物學(xué)功能，不同彈性硬度條件下這些生物學(xué)功能水平差異較大。當(dāng)前利用聚丙烯酰胺凝膠構(gòu)建不同的組織硬度可以影響細胞的生物學(xué)功能，使其能夠更貼近生理環(huán)境。本實驗通過水凝膠模擬人血管內(nèi)皮細胞基底膜彈性硬度，使體外模型的建立能夠更貼近生理環(huán)境，為DENV發(fā)病機制的研究提供一個新的研究模型。目的利用水凝膠HYDROGEL模擬人類血管內(nèi)皮細胞基底膜彈性硬度以登革病毒2型DENV2NGC株感染接種于水凝膠為基底的原代HUVECS觀察HUVECS在水凝膠與普通塑料培養(yǎng)瓶產(chǎn)生IL29的情況。方法1原代人臍靜脈內(nèi)皮細胞的分離、培養(yǎng)及鑒定從健康新生兒的臍帶中分離并培養(yǎng)原代HUVECS利用免疫組織化學(xué)法和流式細胞術(shù)鑒定所分離的細胞。2水凝膠的制備和細胞接種將原代HUVECS接種于丙烯酰胺與聚丙烯酰胺混合配制的水凝膠。3流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡及感染率以MOIMULTIPLICITYOFINFECTION10的DENV2NGC株感染HUVECS利用流式細胞術(shù)檢測48H細胞的凋亡率及病毒的感染率。4基因芯片檢測提取DENV2感染48H的接種于水凝膠和普通塑料瓶的原代HUVECS的總MRNA，送檢樣本進行基因表達譜芯片的檢測。5實時定量PCRQRTPCR及雙抗體夾心ELISA法實驗通過實時定量PCR及雙抗體夾心ELISA法驗證基因芯片檢測相關(guān)基因的表達情況。結(jié)果DENV2NGC株感染培養(yǎng)于水凝膠的原代HUVECS48H利用流式細胞術(shù)檢測證實原代HUVECS的病毒感染率較低細胞凋亡率與水凝膠未感染組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義；通過MRNA基因表達譜芯片、實時熒光定量PCR、雙抗體夾心ELISA法檢測發(fā)現(xiàn)IL29的表達與普通塑料細胞培養(yǎng)瓶接種的原代臍靜脈內(nèi)皮細胞受到病毒感染存在差異。結(jié)論利用DENV2NGC株感染接種于水凝膠的臍靜脈內(nèi)皮細胞通過MRNA基因表達譜芯片檢測發(fā)現(xiàn)IL29的產(chǎn)生并且與體外正常培養(yǎng)條件下受到DENV2NGC株感染后存在差異可能為DENV的發(fā)病機制研究提供新的模型。

簡介：腺病毒5型是一種十分有效的基因治療載體，廣泛應(yīng)用于體內(nèi)體外的基因治療實驗。腺病毒5型能夠感染很多細胞，包括分裂細胞和靜止細胞。它的侵入機制主要包括兩個階段。首先，腺病毒以其KNOB蛋白和柯薩奇腺病毒受體（COXSACKIEADENOVIRUSRECEPT，CAR）結(jié)合，錨定在細胞表面；然后，其五鄰體基底部（PENTONBASE）再與整合素結(jié)合，整合素作為輔助分子介導(dǎo)了病毒內(nèi)吞進入內(nèi)涵體小泡。整個過程中，KNOB起了粘附病毒的作用，五鄰體起了內(nèi)化病毒的作用，它們隔司其職，相互配合，兩者對腺病毒的感染至關(guān)重要。腺病毒用于基因治療的一個主要問題是缺乏靶向性。為了解決這個問題，一個經(jīng)常采用的策略是在KNOB上進行靶向改造，使它不與CAR結(jié)合，而與目標(biāo)受體結(jié)合。為了研究KNOB的結(jié)構(gòu)與功能，本研究表達了KNOB，CAR并制備了KNOB的單克隆抗體。本研究利用大腸桿菌BL21DE3表達了KNOB蛋白。通過NI2NTA系統(tǒng)的純化，純度可達95％以上。同時，我們利用本實驗室昆蟲細胞表達的CAR蛋白，ELISA結(jié)果顯示，兩者有著明顯的結(jié)合，提示所表達的KNOB至少有部分是維持了天然的構(gòu)象。抗KNOB單克隆抗體的制備，除了可以用于KNOB改造的研究外，還可以用于常規(guī)腺病毒5型的檢測及其相關(guān)研究。

簡介：目的人呼吸道合胞病毒HUMANRESPIRATYSYNCYTIALVIRUS，RSV廣泛流行于世界各地，是嬰幼兒下呼吸道感染的最重要病原。目前尚無安全、有效的疫苗用于預(yù)防RSV感染。RSV兩個重要的糖蛋白膜表面表達的融合蛋白FFUSIONPROTEIN，F(xiàn)和粘附蛋白G，是激發(fā)機體產(chǎn)生中和抗體的主要蛋白，也是疫苗研究發(fā)展的重要內(nèi)容。與G蛋白相比，F(xiàn)蛋白有更多的抗原識別位點，不同亞型間F蛋白高度保守、同源性高達86％，能刺激機體產(chǎn)生體液免疫及細胞免疫應(yīng)答，針對F的中和抗體具有交叉保護作用，是RSV疫苗研究的最重要的靶抗原。輔助病毒依賴型腺病毒載體HELPERDEPENDENTADENOVIRALVECT，HDAD主要用于基因治療研究，作為疫苗載體的研究起步較晚，尚沒有作為黏膜基因釋放系統(tǒng)用于疫苗研究的報道。HDAD與腺病毒具有相同的細胞嗜性，對呼吸道上皮細胞具有高效感染的能力，且能長期、持續(xù)表達轉(zhuǎn)基因，具有重要的研究與使用價值。本研究擬構(gòu)建可表達A亞型RSVF蛋白的輔助病毒依賴型腺病毒載體HDADF，并完成大量制備、純化和F蛋白的體外表達鑒定，為進一步的體內(nèi)免疫效果和免疫保護作用研究奠定基礎(chǔ)。方法將帶有CMV啟動子序列的F基因亞克隆至克隆載體PSC11，鑒定正確后，克隆至HDAD質(zhì)粒PSC15B，構(gòu)建PSC15BFHDAD重組質(zhì)粒，PMEⅠ消化PSC15BF去除原核復(fù)制元件及抗性基因，獲得HDADFDNA分子，經(jīng)磷酸鈣共沉淀法轉(zhuǎn)染293CRE4細胞，16H后感染輔助病毒，收獲HDADF載體粗提液，隨后以HDADF粗提液及輔助病毒連續(xù)共感染293CRE4細胞直至HDADF達到復(fù)制極限，同時以可表達Β半乳糖苷酶ΒGALACTOSIDASE，LACZ報告基因的HDADLACZ載體作為平行對照監(jiān)測載體復(fù)制過程。大量制備HDADF，CSCL密度梯度及等密度梯度兩次超速離心純化，利用分子生物學(xué)技術(shù)體外鑒定HDADF表達情況。結(jié)果成功構(gòu)建了可表達RSVF蛋白的HDADF載體，通過與輔助病毒共感染293CRE4細胞及CSCL梯度法超速離心制備了大量純化的HDADF載體，透射電鏡觀察顯示HDAD的直徑約為70NM，具有典型的腺病毒形態(tài)，運用分光光度測定法分析表明純化后HDAD載體顆粒濃度為7410VPML，體外感染293細胞，RTPCR檢測到F基因有轉(zhuǎn)錄，WESTERNBLOT分析表明F蛋白有特異性表達。結(jié)論成功構(gòu)建HDADF載體并在真核細胞中實現(xiàn)表達，為體內(nèi)免疫學(xué)效力試驗奠定基礎(chǔ)，為研制RSV疫苗提供了一種新方法。

簡介：目的在持續(xù)表達HBV的HEPG2215細胞模型及PBSHBV13瞬時轉(zhuǎn)染細胞模型中觀察HBV復(fù)制對HEPG2細胞內(nèi)核酸識別受體及相關(guān)分子表達的影響；比較HBV（）肝癌組織與HBV（）肝癌組織IFI16的表達差異，并探討HBV復(fù)制與細胞內(nèi)DNA識別受體IFI16的相互作用及其機制。方法1提取HEPG2及HEPG2215細胞總RNA，RTQPCR檢測核酸識別受體及相關(guān)分子的表達；2采用PBSHBV13質(zhì)粒轉(zhuǎn)染肝癌細胞系（HEPG2，HUH7），分別在不同時間點提取細胞總RNA，RTQPCR檢測核酸識別受體及相關(guān)分子的表達；3采用IHC及RTQPCR檢測HBSAG（）與HBSAG（）肝癌患者肝組織及外周血白細胞IFI16表達；RTQPCR，WESTERNBLOT，IF及激光共聚焦顯微鏡檢測IFI16在HEPG2215細胞和HEPG2細胞中的表達及分布模式；4采用PBSHBV13質(zhì)粒轉(zhuǎn)染肝癌細胞系（HEPG2，HUH7），在0H，12H，24H，36H，48H后分別提取細胞總RNA及蛋白，RTQPCR及WESTERNBLOT檢測IFI16的表達；ELISA檢測細胞上清中HBSAG和HBEAG表達水平；5采用不同濃度IFI16FL與PBSHBV13質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEPG2細胞，ELISA檢測細胞上清中HBSAG和HBEAG表達水平；RTQPCR檢測細胞上清中HBVDNA水平；同樣方法檢測HEPG2215細胞過表達IFI16對HBV復(fù)制和表達的影響；6比較HBSAG（）與HBSAG（）肝癌患者外周血白細胞中IFI16，IRF3，IFNΒ，NFΚB等的表達情況；IFI16FL與PBSHBV13質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEPG2細胞或IFI16FL單獨轉(zhuǎn)染HEPG2215細胞，RTQPCR檢測細胞中IFI16，IRF3，IFNΒ，NFΚB等表達情況。結(jié)果1RTQPCR檢測結(jié)果表明，與HEPG2細胞相比，HEPG2215細胞中上調(diào)的基因包括RIGI，MDA5和MYD88等；下調(diào)的基因包括IFNΒ，IRF3和IFI16等；2PBSHBV13質(zhì)粒轉(zhuǎn)染肝癌細胞系（HEPG2，HUH7）后可以啟動短暫的固有免疫應(yīng)答，激活RIGI，IFI16等核酸識別受體一過性升高；3IHC結(jié)果顯示HBSAG（）肝癌組織中IFI16蛋白呈陰性表達，HBSAG（）肝癌組織中呈中度陽性表達；HBSAG（）組外周血白細胞中IFI16MRNA水平亦低于HBSAG（）組；HEPG2215細胞中IFI16MRNA的表達水平顯著低于HEPG2細胞，IFI16蛋白表達量與HEPG2細胞相比也顯著降低，其表達均在細胞核內(nèi)；4PBSHBV13質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HEPG2和HUH7后，WESTERNBLOT和RTQPCR檢測顯示IFI16的MRNA及蛋白表達水平隨時間延長而遞減；ELISA結(jié)果顯示細胞培養(yǎng)上清中HBSAG和HBEAG的分泌隨時間延長而遞增；5隨著轉(zhuǎn)染IFI16真核表達質(zhì)粒的增加，HEPG2細胞上清中HBVDNA及HBSAG和HBEAG含量逐漸下降，HEPG2215細胞中檢測到相似作用；6共轉(zhuǎn)染IFI16FL與PBSHBV13質(zhì)粒后RTQPCR檢測HEPG2細胞中IRF3，IFNΒ，NFΚB等基因的表達相對上調(diào)；HEPG2215細胞轉(zhuǎn)染IFI16FL質(zhì)粒后上述基因的表達亦相對上調(diào)。結(jié)論1HEPG2細胞與持續(xù)表達HBV的HEPG2215細胞之間以及轉(zhuǎn)染與未轉(zhuǎn)染PBSHBV13質(zhì)粒的肝癌細胞系之間核酸識別受體及相關(guān)分子的表達存在差異，這些差異表達的分子有可能與HBV持續(xù)感染的發(fā)生相關(guān)；2瞬時轉(zhuǎn)染和持續(xù)表達HBV的肝癌細胞系中IFI16表達下調(diào)，提示HBV復(fù)制對IFI16的表達具有抑制作用，IFI16過表達亦可能通過IFI16STINGIRF3IFNΒ信號通路抑制HBV復(fù)制。本研究的創(chuàng)新點及意義1發(fā)現(xiàn)IFI16具有可抑制HBV復(fù)制與蛋白表達的效應(yīng)，提示IFI16具有抗HBV的固有免疫功能并可能通過IFI16STINGIRF3IFNΒ信號通路發(fā)揮作用；2HBV復(fù)制對IFI16表達具有抑制作用，這可能是HBV逃逸機體固有免疫應(yīng)答而導(dǎo)致慢性感染的機制之一。

簡介：目的柯薩奇病毒B組3型COXSACKIEVIRUSGROUPBTYPE3CVB3感染所致的病毒性心肌炎VIRALMYOCARDITISVMC嚴(yán)重危害人類健康，也是新生兒猝死的重要原因，目前尚無有效的預(yù)防方法。VP1是CVB3的主要中和抗原，能誘導(dǎo)機體產(chǎn)生體液和細胞免疫。以質(zhì)粒為載體構(gòu)建的CVB3VP1基因疫苗免疫小鼠后，雖可誘導(dǎo)產(chǎn)生低效價的中和抗體，但不能有效阻止致死量病毒感染。因此，提高免疫原性、增強免疫效果是CVB3VP1疫苗亟需解決的問題。目前提高免疫效果的關(guān)鍵因素之一是開發(fā)具有較高基因轉(zhuǎn)移率和靶向特異性的轉(zhuǎn)基因載體。在眾多載體體系中，復(fù)制缺陷型腺病毒載體系統(tǒng)（REPLICATIONDEFECTIVEADENOVIRUSVECTSYSTEM以其廣泛的宿主范圍、極高的轉(zhuǎn)染效率以及外源基因高表達等特點，在疫苗載體選擇中表現(xiàn)出優(yōu)勢，成為極具應(yīng)用前景的基因轉(zhuǎn)移載體。盡管腺病毒載體有較高的轉(zhuǎn)染人體細胞的能力，但表達的蛋白如不能很快地穿梭和擴散到更多的免疫活性細胞，仍不能有效提高抗原提呈效率。因此基因預(yù)防的又一關(guān)鍵是使受染細胞表達的抗原蛋白能有效地擴散到免疫活性細胞。VP22是I型單純皰疹病毒UL49基因編碼的長301個氨基酸的堿性蛋白質(zhì)，具有蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域PROTEINTRANSDUCTIONDOMAIN，PTD，能夠把與之融合的蛋白或與之結(jié)合的DNA等大分子跨膜送遞到鄰近細胞。利用這一特性，將與VP22融合的抗原送遞到周圍的免疫活性細胞，提高其抗原的提呈效率，可望顯著增強疫苗的免疫原性。本研究以CVB3為對象，利用ADEASY腺病毒載體系統(tǒng)構(gòu)建、包裝重組腺病毒RADVP22LVP1和RADVP1，并觀察它們在293細胞中的表達，為構(gòu)建用于人類的CVB3疫苗奠定基礎(chǔ)。方法1目的基因的擴增與鑒定以編碼VP22蛋白的質(zhì)粒PAP85H為模板，擴增VP22LINKER基因。以編碼VP1蛋白的質(zhì)粒PCDNA3VP1為模板，擴增VP1和LINKERVP1基因。將上述3種擴增產(chǎn)物分別與PGEMT載體連接，轉(zhuǎn)化DH5Α大腸桿菌，構(gòu)建質(zhì)粒PGEMTVP22L、PGEMTVPL和PGEMTLVP1。提取質(zhì)粒進行酶切鑒定和測序，篩選重組子。2重組穿梭質(zhì)粒的構(gòu)建將上述3種質(zhì)粒以合適的限制性內(nèi)切酶進行雙酶切，回收帶粘末端的3種目的片段，將VP1、VP22LINKER和LINKERVP1分別與經(jīng)相應(yīng)限制性內(nèi)切酶雙酶切的腺病毒穿梭載體PADTRACKCMV連接，經(jīng)轉(zhuǎn)化、篩選和酶切鑒定，構(gòu)建重組穿梭質(zhì)粒ADTRACKCMVVP1和ADTRACKCMVVP22LVP1。3重組腺病毒質(zhì)粒的構(gòu)建將PADTRACKCMV、ADTRACKCMVVP1和ADTRACKCMVVP22LVP13種質(zhì)粒分別用內(nèi)切酶PMEI線性化。利用ADEASY系統(tǒng)，經(jīng)兩步法分別在大腸桿菌BJ5183中與骨架載體PADEASY1同源重組，構(gòu)建重組腺病毒質(zhì)粒PAD、PADVP1和PADVP22LVP1。經(jīng)PACI酶切，PCR鑒定后，將陽性質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入感受態(tài)ECOLIDH5Α，挑取陽性克隆。以堿裂解法大量提取3種重組質(zhì)粒，并用聚乙二醇POLYETHYLENEGLYCOL，PEG沉淀法進行純化。4重組腺病毒的包裝與擴增以上重組腺病毒質(zhì)粒分別用內(nèi)切酶PACⅠ線性化，以陽離子脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染HEK293HUMANEMBRYOKIDNEY293DERIVEDCELLLINE細胞，并觀察報告基因綠色熒光蛋白GREENFLUESCENTPROTEINGFP的表達。凍融法收集初代病毒液。取初代病毒液感染293細胞，逐日觀察細胞病變CYTOPATHICEFFECTCPE，及有無彗星樣斑塊FOCI形成。并經(jīng)三至四輪傳代擴增，提高病毒滴度。5病毒感染后48小時，提取細胞總蛋白，通過WESTERNBLOT檢測病毒蛋白的表達。6重組腺病毒滴度測定待293細胞在96孔板中生長至7080％匯合時，以系列稀釋的上述各代病毒液感染細胞，感染后48小時GFP陽性細胞計數(shù)法測定病毒滴度。病毒滴度熒光細胞數(shù)病毒液的稀釋倍數(shù)病毒液量PFUML結(jié)果1成功構(gòu)建PGEMTVP22L、PGEMTVP1和PGEMTLVP1，采用DNA測序和雙酶切，證實這3段基因片段均與報道的基因序列一致。2成功構(gòu)建穿梭質(zhì)粒ADTRACKCMVVP1和ADTRACKCMVVP22LVP1，限制酶切分析證明均與預(yù)期相符。3成功構(gòu)建重組腺病毒質(zhì)粒PAD、PADVP1和PADVP22LVP1，用PACⅠ酶切得到約30KB的片段和一個30KB或45KB的小片段，PCR鑒定目的基因長度均與預(yù)期值相符。4轉(zhuǎn)染48小時后，熒光顯微鏡下可觀察到293細胞有報告基因GFP的表達，表明重組腺病毒RAD、RADVP1和RADVP22LVP1包裝成功。初代病毒液再次感染293細胞，在熒光顯微鏡下可逐日觀察到細胞病變和熒光聚集，各代病毒液感染細胞后均有特征性彗星樣熒光斑塊形成。5重組腺病毒重新感染293細胞48小時后，提取細胞蛋白，經(jīng)WESTERNBLOT檢測，VP1、VP22LVP1蛋白均有表達。6感染48小時后在熒光顯微鏡下觀察，各組病毒滴度為RAD初代至第四代病毒滴度分別為12105PFUML、407106PFUML、147107PFUML和96107PFUML。RADVP1初代至第四代病毒滴度分別為267105PFUML、182100PFUML、367100PFUML和16107PFUML。RADVP22LVP1初代至第四代病毒滴度分別為253105PFUML、153100PFUML、140107PFUML和677107PFUML。結(jié)論1成功構(gòu)建并包裝重組腺病毒RAD、RADVP1和RADVP22LVP1，體外感染293細胞可見VP1及VP22和VP1融合蛋白的表達。2經(jīng)第三、第四輪擴增，每升高一代可使病毒滴度增加約10倍。3本研究利用ADEASY腺病毒載體系統(tǒng)成功包裝了重組腺病毒載體疫苗RADVP22LVP1和RADVP1，為發(fā)展新型的CVB3載體疫苗奠定基礎(chǔ)。

簡介：情感是人類最重要的生命體驗，而“愛”是最神圣最崇高的情感?？梢哉f，“愛”是一種高度抽象的復(fù)雜概念，“LOVE愛”這一詞語相對其他詞語來說有著最為豐富的涵義。因此，人們通常借助具體的有形的事物描述“愛”的情感。自從20世紀(jì)80年代以來，中外許多學(xué)者對人類的各種情感做了大量研究，其中對“愛”的研究尤其重視，只是大部分著作和研究都把“愛”作為愛情來闡釋，但事實上“ILOVEYOU我愛你”不僅僅被用于愛人之間，也被廣泛用于表達親情和友情美國傳統(tǒng)英語字典1982。親情和友情中的愛也是人類情感中不可缺少的部分，可是在以往的研究中卻被忽略了。國外語言學(xué)界對“愛”隱喻的研究文獻頗豐，但也是主要集中在將“愛”隱喻界定為愛情隱喻的研究。國內(nèi)對此的研究還不夠深入。本文以“愛”的概念隱喻為研究對象，將“愛”分為愛情，親情和友情這三個涵義，從認(rèn)知語言學(xué)視角對“愛”隱喻進行比較詳細的研究，旨在發(fā)掘英漢“愛”的概念隱喻的共性和差異，因此，本文擬對下面三個問題作出回答1什么是“愛”隱喻2從中英歌曲中搜集的語料可以歸納出中英“愛”隱喻有什么共性和差異3這種共性和差異的背后原因是什么本文首先分類分析語料，根據(jù)愛情，親情和友情這三個涵義分別歸納總結(jié)出中英歌曲中“愛”的隱喻，以這三種涵義之間的關(guān)系為依托，詳細分析這三種涵義的“愛”隱喻之間所呈現(xiàn)出來的共性和差異，研究發(fā)現(xiàn)，在表達愛情的“愛”隱喻中，英漢語有許多相同的“愛”隱喻，例如英漢語中都有愛是戰(zhàn)爭，愛是物體愛是珍貴的物體愛是瘋狂等等同時，英漢語各自又有獨特的“愛”概念隱喻，如在英語中有愛是合二為一（兩個互補的部分組成整體），愛是太陽等，在漢語中有愛是緣分，愛是絲綢，愛是合二為一（兩個不分離的個體組成陰陽一對，愛是月亮等。在表達親情的“愛”隱喻中，情況也是一樣，存在共性和差異。相同的親情“愛”隱喻有愛是旅程愛是商品，愛是滋養(yǎng)品，愛的對象是珍貴的物體，愛是機器等等英語中特有的是與上帝有關(guān)的愛隱喻，愛是太陽或光，漢語中特有與佛教有關(guān)的愛隱喻，愛是絲或棉，愛是恩惠，愛是月亮等。在表達友情的“愛”隱喻中相同的“愛”隱喻有愛是擁有的物體愛是商品，愛是管道等同時，中英友情的愛隱喻中也各自存在不同的隱喻，例如，英語中有愛是太陽或光，漢語中有愛是緣分，愛是絲或紐帶等。由此可見，愛情，親情和友情中都同樣呈現(xiàn)了英漢語“愛”隱喻的共性和差異。本文從身體經(jīng)驗和生活經(jīng)驗方面對存在共性的原因進行分析，從自然環(huán)境，文化背景方面對產(chǎn)生差異的原因進行分析，其中文化背景包括對宗教信仰，不同的社會歷史發(fā)展軌跡，思想哲學(xué)基礎(chǔ)和世界觀、價值觀等的分析。更好地了解這種共性和差異背后的深層思維認(rèn)知原因，文化和社會原因?；谝陨嫌懻摚疚膹恼J(rèn)知語言學(xué)的視角從一個新角度為“愛”隱喻的研究提供了支持并豐富了“愛”隱喻的研究。對英語學(xué)習(xí)者、翻譯工作者以及跨文化交流具有參考價值。

簡介：目的1分析老年人睡眠質(zhì)量與認(rèn)知功能的相關(guān)關(guān)系2探討自我按摩訓(xùn)練對老年人睡眠質(zhì)量及認(rèn)知功能的效果。方法本研究為現(xiàn)場實驗性研究。選取長沙市某社區(qū)老年人82人隨機分為對照組和自我按摩組對照組40人自我按摩組42人對照組給予睡眠知識健康宣教在對照組基礎(chǔ)上自我按摩組給予自我按摩訓(xùn)練實施干預(yù)共6個月。分別于干預(yù)前、干預(yù)三個月末、干預(yù)六個月末運用匹茨堡睡眠質(zhì)量指數(shù)PSQI、愛潑沃斯嗜睡量表ESS、簡易精神狀態(tài)量表MMSE、韋氏記憶量表中國修訂版WMSRC中背數(shù)、圖片記憶、聯(lián)想記憶、理解記憶四個分量表對研究對象的睡眠質(zhì)量及認(rèn)知功能進行調(diào)查。采用SPSS170統(tǒng)計軟件建立數(shù)據(jù)庫對資料進行統(tǒng)計描述、卡方檢驗、非參數(shù)秩和檢驗和重復(fù)測量方差分析等統(tǒng)計方法。Α值取005P值均為雙側(cè)概率。結(jié)果1基線調(diào)查結(jié)果顯示82例老年人PSQI、ESS得分分別為889±394、470±380MMSE得分為2377±364韋氏記憶量表的背數(shù)、圖片記憶、聯(lián)想記憶、理解記憶得分分別為926±180、808±362、220±133、513±301。2相關(guān)分析顯示MMSE得分與PSQI、ESS得分呈負(fù)相關(guān)P＜005并且MMSE得分與PSQI因子中主觀睡眠質(zhì)量、入睡時間、睡眠時間、睡眠效率、睡眠障礙呈負(fù)相關(guān)P＜005通過多元線性回歸分析老年人MMSE得分的影響因素年齡、教育水平、PSQI、ESS被納入回歸方程相關(guān)系數(shù)分別為0157、1476、0214、0183決定系數(shù)為0434方程具有統(tǒng)計學(xué)意義P＜001。3干預(yù)前后資料進行重復(fù)測量方差分析顯示PSQI、ESS、MMSE以及韋氏記憶量表四個維度得分在干預(yù)主效應(yīng)和交互作用上均存在統(tǒng)計學(xué)差異0＜005除背數(shù)外其余各變量在時間主效應(yīng)上存在統(tǒng)計學(xué)意義P＜005。結(jié)論1老年人認(rèn)知功能的主要影響因素有年齡、教育水平、PSQI得分、ESS得分教育水平與認(rèn)知功能呈正相關(guān)而年齡、PSQI得分、ESS得分與認(rèn)知功能呈負(fù)相關(guān)。2自我按摩訓(xùn)練能有效改善老年人的睡眠質(zhì)量和認(rèn)知功能。

簡介：本文對社區(qū)護士與臨床護士對優(yōu)質(zhì)護理認(rèn)知進行了比較研究。文章采用便利抽樣法，抽取三所大學(xué)臨床醫(yī)院的臨床護士350名及16個省市的社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)機構(gòu)的社區(qū)護士200名作為研究對象，用自行編制的問卷進行調(diào)查。所有的數(shù)據(jù)利用SPSSFWINDOWS130統(tǒng)計軟件進行了分析。研究表明臨床護士和社區(qū)護士對本研究所給出的優(yōu)質(zhì)護理屬性認(rèn)同度頗高，表明了護士普遍認(rèn)同這些詞句能從不同方面詮釋優(yōu)質(zhì)護理的內(nèi)涵；臨床護士和社區(qū)護士對優(yōu)質(zhì)護理屬性的認(rèn)同度均有顯著性差異，臨床護士的認(rèn)同度高于社區(qū)護士；護士的年齡、護齡、學(xué)歷、月薪等，都對護士對優(yōu)質(zhì)護理的認(rèn)同產(chǎn)生影響，其中以學(xué)歷對護士對優(yōu)質(zhì)護理認(rèn)知的影響最大。

簡介：心肌梗死MYOCARDAILINFARCTION，MI是冠狀動脈粥樣硬化性心臟病簡稱冠心病患者嚴(yán)重的心臟事件，其后的心室重構(gòu)可導(dǎo)致心力衰竭、心跳驟停、惡性室性心律失常甚至心源性猝死，嚴(yán)重威脅人類健康。如何有效防治MI后心室重構(gòu)一直是心血管基礎(chǔ)與臨床研究的重點和熱點。近年來，血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑、血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑和Β受體阻滯劑等多種藥物應(yīng)用于臨床，取得了一定的療效，但仍無法阻止心室重構(gòu)的發(fā)生。這說明影響MI后心室重構(gòu)的因素還有很多。國外學(xué)者初步研究發(fā)現(xiàn)，粘結(jié)蛋白聚糖1SYNDEDAN1，SDC1在心肌損傷修復(fù)過程中作為炎癥和基質(zhì)重構(gòu)的中心調(diào)節(jié)因子出現(xiàn)，在病理性心室重構(gòu)中起負(fù)性調(diào)節(jié)作用，但具體機制尚不明確。作為防治心室重構(gòu)的新靶點，明確SDC1在MI后體內(nèi)表達的特點，并探討其作用和機制具有十分重要的意義。本研究①以MI大鼠為模型，分時段定量觀察SDC1在MI大鼠體內(nèi)表達的時間分布特點；②構(gòu)建攜帶大鼠SDC1CDNA的重組腺病毒載體ADCMVGFPSDC1；③在體轉(zhuǎn)染ADCMVGFPSDC1，使SDC1在MI大鼠體內(nèi)過表達，觀察其對膠原合成、心室重構(gòu)和心臟功能的影響，并初步探討其可能的作用機制，旨在為MI后心室重構(gòu)的防治提供新的思路和實驗依據(jù)。第一章SDC1在MI大鼠體內(nèi)表達的時間分布特點11目的建立MI大鼠模型，定量觀察SDC1在MI大鼠體內(nèi)表達的時間分布特點。12方法121分組SD大鼠44只，結(jié)扎前降支建立MI大鼠模型。術(shù)后24H存活大鼠隨機分為MI1天組MI1D組、MI3天組MI3D組、MI7天組MI7D組和MI14天組MI14D組。另設(shè)假手術(shù)組。每組N6。122方法觀察結(jié)束時處死大鼠，檢測以下指標(biāo)1221MI大鼠模型的建立與評估指標(biāo)①MI面積HE染色；②梗死邊緣區(qū)膠原沉積情況MASSON染色；③心臟功能超聲心動圖和血流動力學(xué)檢查；④心臟重量。1222SDC1在MI大鼠體內(nèi)表達的時間分布特點指標(biāo)檢測不同時間段梗死邊緣區(qū)SDC1MRNAREALTIMEPCR、蛋白WESTERNBLOT和血清中可溶性SDC1ELISA法表達水平。13結(jié)果131MI大鼠模型的建立與評估各組大鼠MI面積無差異P005。假手術(shù)組大鼠心肌膠原纖維少，心臟各室壁厚度正常，運動協(xié)調(diào)。MI14D組大鼠梗死邊緣區(qū)膠原纖維增加，左室前壁變薄，室壁運動減弱或消失，心臟功能下降P001，心室重量增加P001。132SDC1在MI大鼠體內(nèi)表達的時間分布特點假手術(shù)組大鼠心肌SDC1MRNA和蛋白表達量低，血清中可溶性SDC1水平低。MI術(shù)后大鼠梗死邊緣區(qū)SDC1MRNA和蛋白表達逐漸增加，血清中可溶性SDC1水平逐漸升高，三者均在第3天達到高峰，此后逐漸下降，各組比較差別有統(tǒng)計學(xué)意義P001。133PEARSON相關(guān)分析顯示MI大鼠血清中可溶性SDC1水平與梗死邊緣區(qū)心肌組織SDC1蛋白表達水平呈正相關(guān)R0952，N30，T16533，P001。14小結(jié)141采用結(jié)扎前降支法成功建立MI大鼠模型，模型的可重復(fù)性和均一性良好。142基礎(chǔ)狀態(tài)下，大鼠心肌可檢測到SDC1MRNA和蛋白表達，血清中存在可溶性SDC1，三者表達水平均較低。MI大鼠梗死邊緣區(qū)SDC1MRNA和蛋白表達明顯增加，血清中可溶性SDC1水平顯著升高，三者均在第3天達到高峰，此后逐漸下降，呈現(xiàn)動態(tài)變化。143MI大鼠血清中可溶性SDC1水平與梗死邊緣區(qū)心肌組織SDC1蛋白表達水平呈正相關(guān)。第二章重組腺病毒載體ADCMVGFPSDC1的構(gòu)建21目的構(gòu)建攜帶大鼠SDC1CDNA的重組腺病毒載體ADCMVGFPSDC1。22方法采用基因重組技術(shù)和改良的體外連接法構(gòu)建重組腺病毒載體ADCMVGFPSDC1；在293細胞中擴增，CSCL梯度離心純化，以基因測序、酶切及PCR法進行鑒定，用TCID50法測定病毒的生物活性。23結(jié)果基因測序顯示質(zhì)粒PCMVSPT61SDC1正確攜帶大鼠SDC1基因。酶切結(jié)果顯示成功構(gòu)建出重組穿梭質(zhì)粒和重組腺病毒質(zhì)粒。PCR證實重組腺病毒攜帶SDC1基因片段，提示ADCMVGFPSDC1構(gòu)建成功。TCID50法測得重組腺病毒生物活性為21011PFUML。24小結(jié)采用基因重組技術(shù)和改良的體外連接法成功構(gòu)建出攜帶大鼠SDC1基因的重組腺病毒載體ADCMVGFPSDC1，經(jīng)擴增和純化，獲得重組腺病毒生物活性為21011PFUML。第三章SDC1過表達對MI大鼠心室重構(gòu)的影響及機制探討31目的在體轉(zhuǎn)染ADCMVGFPSDC1，觀察SDC1過表達對MI大鼠心室重構(gòu)和心臟功能的影響并探討其可能的作用機制。32方法321分組SD大鼠48只，結(jié)扎前降支術(shù)后即刻，在梗死邊緣區(qū)行心肌內(nèi)注射。根據(jù)注射內(nèi)容物的不同分組①MIADCMVGFPSDC1轉(zhuǎn)染組N8，注射ADCMVGFPSDC1；②MIADGFP對照組N8，注射ADGFP；③MI鹽水組N8，注射生理鹽水；④假手術(shù)組N6。322方法重組腺病毒轉(zhuǎn)染術(shù)后14天處死大鼠，檢測以下指標(biāo)3221重組腺病毒轉(zhuǎn)染與鑒定的指標(biāo)①注射點腺病毒的表達觀察綠色熒光；②梗死邊緣區(qū)SDC1MRNAREALTIMEPCR、蛋白WESTERNBLOT和血清中可溶性SDC1ELISA法表達水平。3222SDC1過表達對MI大鼠心室重構(gòu)影響的指標(biāo)①Ⅰ型、Ⅲ型膠原表達比例天狼星紅染色和排列情況透射電鏡；②Ⅰ型、Ⅲ型膠原MRNA水平REALTIMEPCR法；③MI面積、CVF、羥脯氨酸含量、膠原含量和心臟重量。3223SDC1過表達對MI大鼠心臟功能影響的指標(biāo)超聲心動圖和血流動力學(xué)檢查。3224SDC1作用機制探討的指標(biāo)①對炎癥的影響HE染色；②對心肌細胞凋亡的影響TUNEL法；③P38MAPKMRNAREALTIMEPCR和蛋白WESTERNBLOT法表達水平。34小結(jié)341采用心肌內(nèi)注射法成功在體轉(zhuǎn)染重組腺病毒，使SDC1在轉(zhuǎn)染后的MI大鼠體內(nèi)過表達。342MI大鼠心室重量和膠原含量增加，心功能下降，存在心室重構(gòu)。SDC1過表達能減輕心室重量，減少膠原合成，改善心室重構(gòu)和心臟功能，提示SDC1可能在MI后心室重構(gòu)中具有重要作用。343MI大鼠梗死邊緣區(qū)有大量炎癥細胞浸潤，心肌細胞大量凋亡；SDC1過表達能減少炎癥細胞和凋亡細胞，提示SDC1可能通過影響炎癥反應(yīng)和心肌細胞凋亡參與MI后心室重構(gòu)。344MI大鼠梗死邊緣區(qū)P38MAPK信號傳導(dǎo)通路明顯活化，SDC1過表達能抑制P38MAPK信號傳導(dǎo)通路活性，提示SDC1可能通過P38MAPK信號傳導(dǎo)通路起作用，但具體機制有待進一步研究。全文結(jié)論41MI大鼠梗死邊緣區(qū)SDC1MRNA和蛋白表達增加，血清中可溶性SDC1水平升高，三者均在第3天達到高峰，此后逐漸下降，呈現(xiàn)動態(tài)變化。MI大鼠血清中可溶性SDC1水平與梗死邊緣區(qū)心肌組織SDC1蛋白表達水平呈正相關(guān)。42采用基因重組技術(shù)和改良的體外連接法，成功構(gòu)建出攜帶大鼠SDC1基因的重組腺病毒載體。43采用心肌內(nèi)注射法成功在體轉(zhuǎn)染重組腺病毒，使SDC1在轉(zhuǎn)染后的MI大鼠體內(nèi)過表達。44SDC1過表達能抑制MI大鼠梗死邊緣區(qū)膠原合成，改善心室重構(gòu)和心臟功能，提示SDC1可能在MI后心室重構(gòu)中具有重要作用。45SDC1過表達能抑制MI大鼠梗死邊緣區(qū)炎癥反應(yīng)和細胞凋亡，提示SDC1可能通過影響炎癥反應(yīng)和細胞凋亡參與MI后心室重構(gòu)。46SDC1過表達能抑制MI大鼠梗死邊緣區(qū)P38MAPK信號傳導(dǎo)通路的活性，提示SDC1可能通過P38MAPK信號傳導(dǎo)通路起作用，但具體機制有待進一步研究。

簡介：目的觀察黃芪注射液對慢性腦缺血患者認(rèn)知功能障礙的影響，并進行該藥的安全性評價，為進一步拓展黃芪注射液的臨床應(yīng)用提供研究依據(jù)方法200506200609在廣西中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院老年病科住院或門診。根據(jù)時間順序收集符合納入標(biāo)準(zhǔn)的慢性腦缺血合并認(rèn)知功能障礙患者86例，按隨機分組表入組，觀察組43例，對照組43例。兩組于入院后均按西醫(yī)治療原則，采用常規(guī)治療方法，予對癥治療，同時給予口服尼莫地平片40MG，3次天。在上述基礎(chǔ)上，觀察組予黃芪注射液廣西中醫(yī)學(xué)院一附院制劑室提供（含生藥500GL），批號桂衛(wèi)藥制字1998005090100ML靜脈點滴，1次天，每療程30D，連用2個療程。認(rèn)知功能障礙療效評估采用簡易智力狀況檢查量表MMSE及長谷川癡呆量表（HDS），腦血流評估采用經(jīng)顱多普勒TCD檢查分析，血液流變學(xué)檢查采用重慶維多公司F03010B全自動血液流變儀（壓力法）測定，并進行用藥前后肝、腎功能、血、尿常規(guī)測定。結(jié)果86例患者全部進入結(jié)果分析。1、一般資料顯示年齡、性別、病程、體重指數(shù)、病情程度和合并癥等在治療前兩組比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義P＞005。2、治療后觀察組簡易智力狀況檢查量表和長谷川癡呆量表積分較治療前及治療后對照組顯著提高（P＜001或P＜005）兩組簡易智力狀況檢查量表和長谷川癡呆量表積分治療前后差值均數(shù)比較差異有顯著性P＜001。3、認(rèn)知功能療效評定，觀察組總有效率高于對照組100％，7907％，P＜001。4、經(jīng)顱多普勒檢查和血液流變學(xué)各項指標(biāo)檢測觀察組均優(yōu)于對照組（P＜001或P＜005）。5、治療前后86例患者的肝、腎功能、血、尿常規(guī)均無異常改變，治療過程中亦未出現(xiàn)明顯不良反應(yīng)。結(jié)論黃芪注射液具有顯著改善慢性腦缺血患者認(rèn)知功能、提高臨床療效，并具有改善腦血流和血液流變學(xué)等作用。提示黃芪注射液對慢性腦缺血患者具有較好的臨床治療效果且安全性良好。

簡介：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)（北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院）博士學(xué)位論文腺相關(guān)病毒介導(dǎo)Β淀粉樣肽單鏈抗體基因治療阿爾茨海默病的研究姓名劉飛申請學(xué)位級別博士專業(yè)臨床醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師王世真李方20070601第二部分PSNAV20EGFP轉(zhuǎn)染小鼠肺癌LA795穩(wěn)定細胞系的建立。經(jīng)磷酸鈣共沉淀法將PSNAV20EGFP轉(zhuǎn)入LA795細胞，2天后加入6001AG／RTL的G418抗生素篩選，抑制沒有轉(zhuǎn)入或者沒有穩(wěn)定轉(zhuǎn)入外源基因的細胞生長，經(jīng)過2周的篩選后，僅剩下穩(wěn)定轉(zhuǎn)染表達EGFP的細胞，通過有限稀釋法，將這些細胞盡量以單細胞分入96孔板繼續(xù)培養(yǎng)，并加入3001AG／GL的G418維持濃度。當(dāng)細胞分裂增長呈克隆后，再轉(zhuǎn)入48孔板繼續(xù)培養(yǎng)，繼而轉(zhuǎn)入24孔板，6孔板，最后得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染PSNAV20EGFP的小鼠肺癌LA795細胞系；結(jié)論經(jīng)過磷酸鈣共沉淀法聯(lián)合G418抗生素的篩選，可以得到穩(wěn)定表達外源基因的細胞系，該株細胞可作為包裝細胞系，用于重組腺相關(guān)病毒的包裝。第三部分AAV20EGFP和AAV20VEGFIRESEGFP的包裝和純化。以RAAVHELPERFREESYSTEM為生產(chǎn)平臺，以STRATEGENE公司的PHELPER和PAAVRC為輔助質(zhì)粒，聯(lián)合PSNAV20EGFP，采用磷酸鈣法三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染的技術(shù)將三個質(zhì)粒轉(zhuǎn)入HEK293T細胞中，3天后搜集純化病毒，測定病毒生物滴度。結(jié)論以STRATEGENE公司的PHELPER和PAAVRC為輔助質(zhì)粒，加上本元正陽公司的載體質(zhì)粒PSNAV20EGFP，利用三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)的方法可以成功包裝出有生物活性的重組腺相關(guān)病毒顆粒，經(jīng)過初步純化后可用于細胞試驗。第四部分AAV20一A13SCFV的包裝和純化。PHELPER、PAAVRC、PSNAV20A13SCFV共同轉(zhuǎn)染HEK293T細胞中，三天后搜集病毒，并初步純化，將搜集到的病毒轉(zhuǎn)染HELA細胞，WESTERN法測定單鏈抗體

簡介：目的通過對華北制藥集團新藥研究開發(fā)有限責(zé)任公司生產(chǎn)的HUMABSNM57在大鼠和獼猴體內(nèi)的藥代動力學(xué)研究，為HUMABSNM57的藥代動力學(xué)特點提供客觀準(zhǔn)確的評價，為其臨床研究給藥方案的設(shè)計和優(yōu)化提供有力的理論依據(jù)。方法放射性同位素Ⅰ標(biāo)記法結(jié)合TCA沉淀法以及凝膠高效液相色譜法SHPLC研究HUMABSNM57在大鼠體內(nèi)的吸收、分布、代謝和排泄過程。間接ELISA法測定獼猴血清樣品中HUMABSNM57的濃度，研究HUMABSNM57在獼猴體內(nèi)的代謝過程。結(jié)果和結(jié)論獼猴IM20IUML、60IUML和120IUMLHUMABSNM57后，吸收較慢，血清藥物濃度分別于920±541H、840±433H、800±277H達峰，峰濃度分別為2176±672NGML、8124±1246NGML和17838±3567NGML，隨后開始一個較慢的消除過程，三個劑量組的血清藥物濃度均可檢測至552H，到552H基本降至本底。低、中、高劑量組給藥劑量之比為136，藥物峰濃度之比為13782，AUC之比為15097，基本與給藥劑量成正相關(guān)，提示該藥的線性藥代動力學(xué)特性。低、中、高劑量組之間部分時間點的血清藥物濃度差別有統(tǒng)計學(xué)意義。獼猴IV20IUMLHUMABSNM57后，5MIN血藥濃度為8229±1159NGML，隨后逐漸降低，到552H基本降到本底水平。與IM等劑量HUMABSNM57相比，在120H前IV血藥濃度高于IM，120H后IM高于IV，408H以后趨于相似。IV和IM組相同時間點配對T檢驗有少數(shù)時間點差別有統(tǒng)計學(xué)意義。獼猴IM20IUMLHUMABSNM57的絕對生物利用度是726％±337％，但獼猴個體之間差異較大。獼猴L(fēng)M20IUMLHUMABSNM57的同時在第0、3、7、14天IM狂犬疫苗，與獼猴單獨IV20IUKGHUMABSNM57組相同時間點進行配對T檢驗，240H前差別沒有統(tǒng)計學(xué)意義，240H后差別有統(tǒng)計學(xué)意義，肌注狂犬疫苗組的抗狂犬病毒抗體在408H后激增，符合狂犬病毒疫苗的作用原理。SD大鼠IMIHUMABSNM57后，吸收較慢，達峰時間T平均為440±145H；總放射性和酸沉放射性峰濃度分別為4982±369NGML和4936±372NGML；AUC分別為776±169ΜGHML和756±168ΜGHML；MRT分別為1027±182H和1005±184H；清除率CL分別為13±02MLHKG和13±02MLHKG；VSS分別為1307±63MLKG和1322±64MLKG；末端消除相半衰期T分別為1150±351H和986±300H?？偡派湫院蚑CA沉淀放射性的絕對生物利用度分別為813±44％和792±83％，生物利用率比較高。HUMABSNM57在小鼠體內(nèi)廣泛分布，無明確的靶向性，排泄主要途徑是尿液排泄。藥物的血漿蛋白結(jié)合試驗表明IHUMABSNM57不與大鼠的血漿蛋白結(jié)合。