簡介：背景與目的本課題組之前采用克隆測序CBS的方法研究發(fā)現(xiàn)乙型肝炎病毒HBV逆轉(zhuǎn)錄酶區(qū)（RT區(qū)）準(zhǔn)種異質(zhì)性可作為接受核苷類似物治療患者抗病毒療效的一個預(yù)測指標(biāo)。近年來，第二代測序技術(shù)NGS以其相對快速、超深度、高靈敏度的特點給HBV準(zhǔn)種研究帶來了新的策略。目前對于HBV感染后不同臨床階段的病毒全長準(zhǔn)種異質(zhì)性的研究還未見報道。本研究應(yīng)用CBS及NGS方法擴增并獲得急性乙型肝炎（AHB）、慢性HBV攜帶IT、慢性乙型肝炎CHB、慢加急性乙型肝炎伴肝衰竭ACLF、代償期肝硬化LC患者血清病毒全長序列，結(jié)合生物信息學(xué)分析方法描述準(zhǔn)種遺傳異質(zhì)性特征及探討其臨床意義，以期更好的闡述HBV自然史及致病機制。研究對象與方法本研究共納入97名HBV感染的患者（AHB、IT、CHB、ACLF、LC）。40例應(yīng)用CBS方法、87例應(yīng)用NGS方法（30例同時應(yīng)用兩種方法）獲得HBV全長基因組的準(zhǔn)種后，通過生物信息學(xué)方法對準(zhǔn)種的異質(zhì)性（復(fù)雜度和離散度）特征進行分析，并建立了NGS大數(shù)據(jù)初篩流程和質(zhì)控方法，最后分析五種不同感染階段的病毒準(zhǔn)種異質(zhì)性、氨基酸突變指數(shù)、單個核苷酸復(fù)雜度、CPPREC核苷酸突變率的特點及其與臨床病程演變的相關(guān)性。結(jié)果第一部分40例HBV感染患者，采用CBS方法，平均每名患者獲得1417株HBV全長克隆，急性HBV感染的準(zhǔn)種復(fù)雜度較慢性HBV感染的準(zhǔn)種復(fù)雜度低慢性HBV感染免疫耐受期準(zhǔn)種復(fù)雜度低于免疫清除期不同的免疫壓力下CE區(qū)AA60130及X區(qū)AA131135氨基酸變異指數(shù)MFI有統(tǒng)計學(xué)差異，ACLF在這些區(qū)域氨基酸突變指數(shù)大于IT及AHB，CHB次之。高突變位點集中在CE區(qū)T、B細(xì)胞表位。第二部分87例HBV感染患者，采用ILLUMINAMISEQ高通量測序獲得30G數(shù)據(jù)，經(jīng)過數(shù)據(jù)初篩獲得可分析數(shù)據(jù)20G，約12000000條序列進入最終分析階段。在建立高通量測序的大數(shù)據(jù)篩選流程的基礎(chǔ)上，對于高通量數(shù)據(jù)進行篩選（步驟包括測序質(zhì)量、測序長度、序列比對優(yōu)化、PCR錯誤糾正優(yōu)化、內(nèi)參質(zhì)控評價）和生物信息學(xué)分析，每個區(qū)段豐度（除P3外）中位數(shù)為6000150020000。在五種不同感染階段中，IT的復(fù)雜度SN和平均遺傳距離D最低，其次為CHB和AHB，ACLF與LC的SN和D最高。準(zhǔn)種的SN和D在CHB患者中與高谷丙轉(zhuǎn)氨酶＞5ULN、與總膽紅素＞1ULN血癥、與ACLF預(yù)后無關(guān)。BCPPREC區(qū)核苷酸的分析發(fā)現(xiàn)ACLF和LC患者在CP區(qū)A1762T、G1764A、A1846TC的變異率達到50％90％，高于其他組P＜0001。T1800C在感染B基因型的ACLF患者中變異率最高達46％，而在C基因型中僅有24％。未經(jīng)核苷類似物治療的患者病毒準(zhǔn)種耐藥位點突變率在LC組高于其他組14％VS＜1％。CBS與NGS的SN和D相關(guān)性和一致性較差P＞005。綜合上述結(jié)果發(fā)現(xiàn)，AHB準(zhǔn)種異質(zhì)性在CBS研究中為最低，但是在NGS研究中高于IT及CHB準(zhǔn)種異質(zhì)性。慢性感染患者的HBV準(zhǔn)種復(fù)雜度與免疫壓力和感染時間有關(guān)，即免疫壓力越大ACLF，感染時間越長LC，復(fù)雜度越高，B細(xì)胞表位對應(yīng)的氨基酸突變率HBCAG越高。IT患者三年的HBV準(zhǔn)種變化的主要發(fā)生在HBSAGRT區(qū)域，表現(xiàn)為突變的積累。結(jié)論本研究建立了ILLUMINAMISEQ高通量測序研究HBV準(zhǔn)種的大數(shù)據(jù)篩選流程和質(zhì)控分析方法，發(fā)現(xiàn)在低豐度變異的檢測和準(zhǔn)種模擬方面，ILLUMINAMISEQ描述準(zhǔn)種異質(zhì)性的表現(xiàn)力較CBS方法更敏感、準(zhǔn)確和高效。對HBV準(zhǔn)種異質(zhì)性的分析可以間接反映機體免疫系統(tǒng)對病毒的應(yīng)答狀態(tài)及感染時間的長短，從而為臨床個體化抗病毒治療提供科學(xué)依據(jù)。

簡介：點擊查看更多應(yīng)用抑制性消減雜交技術(shù)克隆丙型肝炎病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NS3反式激活的相關(guān)基因.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：乙型肝炎病毒HBV能引發(fā)乙型肝炎進而誘發(fā)嚴(yán)重的肝臟疾病，而其治療的藥物僅限于干擾素和核苷兩大類藥物。本文在我們課題組原有的工作基礎(chǔ)上，設(shè)計合成了一類新型的抑制HBV的化合物。我們所做的設(shè)計和合成是在NAOH作用下，在DMSO溶劑中，分別用乙酰苯胺、乙酰鄰甲氧基苯胺、乙酰對氟苯胺、乙酰鄰氟苯胺、乙酰對甲基苯胺、乙酰萘胺與EN，N二甲基3苯基2氯甲基烯丙胺反應(yīng)，所得產(chǎn)物分別用雙氧水氧化，得到目標(biāo)產(chǎn)物ZN苯基N2N’，N’二甲基氧代氨基甲基3苯基烯丙基乙酰胺、ZN2甲氧基苯基N2N’，N’二甲基氧代氨基甲基3苯基烯丙基乙酰胺、ZN4氟苯基N2N’，N’二甲基氧代氨基甲基3苯基烯丙基乙酰胺、ZN2氟苯基S2N’，N’二甲基氧代氨基甲基3苯基烯丙基乙酰胺、ZN4甲基苯基N2N’，N’二甲基氧代氨基甲基3苯基烯丙基乙酰胺、ZN1萘基N2N’，N’二甲基氧代氨基甲基3苯基烯丙基乙酰胺。所有化合物的總收率較高。目標(biāo)產(chǎn)物通過紅外光譜和核磁共振波譜進行結(jié)構(gòu)鑒定并通過抗乙型肝炎病毒活性篩選，結(jié)果表明化合物ZN苯基N2N’，N’二甲基氧代氨基甲基3苯基烯丙基乙酰胺、ZN2甲氧基苯基N2N’，N’二甲基氧代氨基甲基3苯基烯丙基乙酰胺、ZN4氟苯基N2N’，N’二甲基氧代氨基甲基3苯基烯丙基乙酰胺、ZN4甲基苯基N2N’，N’二甲基氧代氨基甲基3苯基烯丙基乙酰胺、ZN1萘基N2N’，N’二甲基氧代氨基甲基3苯基烯丙基乙酰胺對乙肝病毒表面抗原的分泌有抑制作用。

簡介：20多年來，高等職業(yè)教育已經(jīng)成為我國高等教育體系的重要組成部分，發(fā)展規(guī)模越來越大。它的教育目的就是要給受教育者一種社會準(zhǔn)入的職業(yè)技術(shù)能力。所以培養(yǎng)出高質(zhì)量、高素質(zhì)的職業(yè)技術(shù)人才，是當(dāng)前高等職業(yè)教育發(fā)展的迫切要求。這就要求教育工作者要了解和把握學(xué)生的特點，根據(jù)學(xué)生的特點制定出相應(yīng)的教學(xué)策略，通過教學(xué)，提高學(xué)生的能力，促進學(xué)生的全面發(fā)展，培養(yǎng)出社會所需要的人才，以滿足當(dāng)前高等職業(yè)教育發(fā)展的迫切要求。對學(xué)生個性差異的研究一直是教育教學(xué)領(lǐng)域所關(guān)注的一個問題。在學(xué)校環(huán)境下，學(xué)生的個別差異主要表現(xiàn)在基礎(chǔ)知識的差異、學(xué)習(xí)動機的差異、能力的差異、認(rèn)知風(fēng)格的差異等等。雖然目前有許多關(guān)于高等職業(yè)技術(shù)教育的研究，但查閱了大量的文獻資料后發(fā)現(xiàn)，對高等職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)生特點的研究，尤其是學(xué)生認(rèn)知風(fēng)格特點的研究以及探討與之相適應(yīng)的課堂教學(xué)策略的研究還很少。本文通過對國內(nèi)外認(rèn)知風(fēng)格理論的分析，闡述了研究高職學(xué)生認(rèn)知風(fēng)格的意義，并通過實驗探討其與化學(xué)教學(xué)策略之間的關(guān)系，從而指導(dǎo)和促進教學(xué)。認(rèn)知風(fēng)格是個體在組織和加工信息中所具有的個性化和一貫的方式。其研究領(lǐng)域已涉及感覺、知覺、記憶、思維、決策和問題解決等諸多方面。認(rèn)知風(fēng)格有很多種，其中最著名的是場獨立性和場依存性。文中針對這一認(rèn)知風(fēng)格做了進一步闡述。研究表明，學(xué)生的認(rèn)知風(fēng)格不但影響他們的學(xué)習(xí)成績，而且造就他們適應(yīng)社會的能力。如果在教學(xué)中了解了學(xué)生認(rèn)知風(fēng)格的特點，采用相應(yīng)的教學(xué)策略，使學(xué)生真正成為學(xué)習(xí)的主體，勢必能促使學(xué)生學(xué)習(xí)能力的提高。本文利用“鑲嵌圖形測驗量表”對濟南工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院兩個專業(yè)學(xué)生的認(rèn)識風(fēng)格進行測量，據(jù)此結(jié)果將學(xué)生的認(rèn)知風(fēng)格類型劃分為場獨立性和場依存性，然后針對不同認(rèn)知風(fēng)格制定相應(yīng)的教學(xué)策略并運用到化學(xué)教學(xué)實踐中去。經(jīng)過近一年的實驗研究，基本達到了預(yù)期的研究目的。實驗證明，高職學(xué)生認(rèn)知風(fēng)格以場依存性風(fēng)格為主。不同的教學(xué)策略，對不同認(rèn)知風(fēng)格的學(xué)生學(xué)習(xí)效果的影響是不同的。一般來說，采取與學(xué)生認(rèn)知風(fēng)格相匹配的教學(xué)策略，會提高學(xué)生的學(xué)習(xí)成績，有利于培養(yǎng)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣和思維，促進學(xué)生的個性發(fā)展。場獨立性學(xué)生的成績總體上要高于場依存性學(xué)生的成績。

簡介：目的通過對慢性乙型病毒性肝病糖代謝紊亂的規(guī)律性及治療性研究，系統(tǒng)調(diào)查分析該病的發(fā)病規(guī)律、病機、證候特點及其相關(guān)影響因素，觀察肝榮湯臨床療效，以期中醫(yī)治療該病在療效上有循證意義上的突破。方法規(guī)律性研究歸納慢乙肝各型糖代謝紊亂的發(fā)病率、程度、相關(guān)因素分析，探討該病的中醫(yī)病機規(guī)律，確立中醫(yī)辨證分型，制定辨證治療原則。治療性研究于納入規(guī)律性研究的171例慢乙肝患者中按61比例隨機選取32名患者進行同步治療性研究，以健脾疏肝、清熱利濕化痰、活血解毒法組方為肝榮湯，每日一劑，療程2個月。嚴(yán)格規(guī)定清淡飲食。觀察對肝功能、糖代謝及腫瘤壞死因子Α的影響。結(jié)果經(jīng)多元線性逐步回歸分析，慢性乙型病毒性肝病糖代謝紊亂程度與既往不正確用藥史、飲食習(xí)慣、TNFΑ、體重指數(shù)BMI、AST、ALT、B超圖像肝臟損傷程度有顯著相關(guān)性。治療性研究結(jié)果顯示，肝榮湯治療該病總有效率656％，改善中醫(yī)癥狀總有效率100％，可明顯降低ALT、AST、6GT、TBIL、G，升高白蛋白、AG，治療后空腹血糖明顯降低P001，胰島素敏感指數(shù)明顯升高，胰島素抵抗指數(shù)明顯下降PO05，TNFΑ明顯降低P005。結(jié)論慢性乙型病毒性肝病早期即可繼發(fā)糖代謝紊亂，若生活與飲食不科學(xué)、治療不當(dāng)可促進肝源性糖尿病的進展，健脾疏肝、清熱利濕化痰、活血解毒法可以有效地改善肝臟功能，明顯逆轉(zhuǎn)繼發(fā)的糖代謝紊亂。

簡介：人類社會從工業(yè)時代進入到信息時代，越來越多的數(shù)字產(chǎn)品出現(xiàn)在我們的生活中，引導(dǎo)著現(xiàn)代社會的人們進入一種新的生活方式。面對這些變化，工業(yè)設(shè)計應(yīng)該調(diào)整它的思維方向與所扮演的角色，改變所使用的工具與方法，來迎接數(shù)字時代的挑戰(zhàn)。數(shù)字產(chǎn)品與傳統(tǒng)工業(yè)產(chǎn)品比較，最顯著的變化是極大地與計算機技術(shù)的相結(jié)合，而這種變化的最根本表現(xiàn)形式就是人機界面。人機界面的設(shè)計是一個信息傳達的過程。在與人機界面相關(guān)的學(xué)科領(lǐng)域里，認(rèn)知心理學(xué)作為新興的心理學(xué)研究方向，對其有極大的指導(dǎo)作用。認(rèn)知心理學(xué)的核心就是信息加工。通過研究用戶的心理特點和認(rèn)知特性，設(shè)計出用戶滿意的人機界面。然而不同的用戶有著明顯的年齡差異和個體差異。論文就是針對老年人這一特殊的需求群體展開研究的。論文前兩章是人機界面設(shè)計的基本理論，包括人機界面的概念、發(fā)展，在數(shù)字時代的表現(xiàn)特征，以及相關(guān)的認(rèn)知心理學(xué)理論；第三章和第四章是重點，針對老年用戶在人機界面上使用的認(rèn)知特點和需求，分析建立老年人信息加工模型，并研究該模型在老年人機界面上的應(yīng)用；從而完成老年人機界面的有效形成，并歸納老年人數(shù)字產(chǎn)品人機界面的設(shè)計原則，并以此指導(dǎo)進行設(shè)計實踐。論文為進行老年人數(shù)字產(chǎn)品的設(shè)計提供了一定的方法和原則，體現(xiàn)了人性化設(shè)計和對老年人關(guān)愛的以人為本的設(shè)計思想。

簡介：中山大學(xué)碩士學(xué)位論文鼻咽癌中EB病毒BAMHIF片段基因變異及其意義姓名劉秋雨申請學(xué)位級別碩士專業(yè)病理學(xué)指導(dǎo)教師韓安家王連唐20070510中山大學(xué)碩士學(xué)位論文鼻嘲瘟EB病毒BAMHIF片段基囡變異及其意義中文摘要變異的情況及其與FASCIN和PSTAT3表達的關(guān)系，并通過以下四方面問題的研究，為EB病毒感染在鼻咽癌發(fā)生發(fā)展中作用機制的闡明提供一定的實驗基礎(chǔ)和理論依據(jù)。①鼻咽癌高發(fā)區(qū)廣東地區(qū)鼻咽原發(fā)癌、相應(yīng)的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌以及鼻咽粘膜慢性炎中EB病毒BAMHIF片段基因變異情況如何②鼻咽癌患者放療前后及健康人外周血單個核細(xì)胞中EB病毒BAMHIF片段基因變異情況如何③鼻咽原發(fā)癌及相應(yīng)的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌組織中FASCIN和PSTAT3表達情況及其與EB病毒致瘤基因LMPI表達有無關(guān)系④鼻咽癌組織EB病毒BAMHL‘甲’變異與FASEIN、PSTAT3及癌細(xì)胞增殖、凋亡的關(guān)系如何本研究采用PCR和限制性片段長度多態(tài)性RESTRIETIONFRAGMENTLENGTHPOLYMORPHISM，RFLP分析技術(shù)檢測了21對鼻咽原發(fā)癌及其相應(yīng)的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌組織、22例未伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的鼻咽癌組織、50例鼻咽粘膜慢性炎組織、37例鼻咽癌患者其中放療前23例，放療后14例和60例健康人外周血單個核細(xì)胞中EB病毒BAMHI‘‘F’變異情況。采用原位分子雜交和免疫組織化學(xué)法分別檢測了21對鼻咽原發(fā)癌及其相應(yīng)的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌組織、22例未伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的鼻咽癌組織中EBEREB病毒編碼的小RNA的表達及LMPI、FASCIN、PSTAT3、BEL2、P53、和KI67蛋白的表達。作者分別檢測了2L對鼻咽原發(fā)癌及其相應(yīng)的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌組織、22例未伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的鼻咽癌組織中EB病毒BAMHLF’基因變異情況，結(jié)果“F，’變異的例數(shù)分別為LL例524％，11／21、12例571％，12，21、18例818％，18／22。43例所有鼻咽原發(fā)癌組織中674％29／43呈EB病毒BAMHL“F，’變異。50例鼻咽粘膜慢性炎組織中有47例PCR成功擴增出EB病毒BAMHLF片段，進一步分析僅1例21％，L／47呈BAMHL‘‘F’’變異。由此可見，高發(fā)區(qū)鼻咽癌組織中EB病毒BAMHI‘‘F’變異率遠(yuǎn)高于同一地區(qū)鼻咽粘膜慢性炎組織，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義仁町00。同時，表現(xiàn)為‘‘F’變異的L例鼻咽粘膜慢性炎呈“F／F’型，且其組織學(xué)可見部分鼻咽上皮出現(xiàn)輕度的不典型增生。我們推測本例‘叩’變異的出現(xiàn)很可能來自這些不典型增生的鼻咽上皮細(xì)胞。而“P’可能來自間質(zhì)B淋巴細(xì)胞EBER染色可見問質(zhì)少數(shù)淋巴細(xì)胞呈陽性，提示EB病毒“F，變異的出現(xiàn)可能是一早期事件。作者對鼻咽原發(fā)癌及其相應(yīng)的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌組織中BAMHL‘‘F’變異的檢測，發(fā)現(xiàn)二者變異率基本一致。另外，有L例在原發(fā)癌呈“F’型，而在相應(yīng)的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌則呈‘‘F’變異型，提示“F’變異在鼻咽癌的進展中可能仍起一定作用。有趣的是，有4例在原發(fā)癌呈N

簡介：風(fēng)險決策RISKDECISIONMAKING是指個體在能夠估計或預(yù)測未來事件發(fā)生概率的情況下選擇預(yù)期效果最好的方案的決策。風(fēng)險決策是日常生活中普遍存在的一種適應(yīng)性行為，不僅關(guān)系到個體生活的和諧、企業(yè)的經(jīng)營管理，而且對國計民生也有深遠(yuǎn)影響。因此，對風(fēng)險決策的認(rèn)知和神經(jīng)機制進行深入的研究具有重要的理論價值和實踐意義。先前，已經(jīng)有大量研究考察了即時的情境情緒對風(fēng)險決策影響，然而從特質(zhì)性情緒角度來探討風(fēng)險決策的認(rèn)知機制與神經(jīng)基礎(chǔ)的研究則很少。因此，本研究使用行為實驗和靜息態(tài)功能性磁共振技術(shù)RESTINGSTATEFMRI技術(shù)，采用比較真實模擬現(xiàn)實情境的“接受還是放棄”式?jīng)Q策任務(wù)，主要研究以下兩個問題1特質(zhì)性焦慮影響風(fēng)險決策的認(rèn)知機制（研究一）2特質(zhì)性焦慮影響風(fēng)險決策的神經(jīng)機制（研究二）。研究一采用行為實驗的方式，探討了特質(zhì)性焦慮對風(fēng)險決策的影響及其作用機制。研究結(jié)果表明1特質(zhì)性焦慮對風(fēng)險決策的反應(yīng)時和冒險傾向都有影響個體的特質(zhì)性焦慮水平越高，其決策反應(yīng)時越長，越傾向于風(fēng)險規(guī)避，而特質(zhì)性焦慮水平越低，決策反應(yīng)時越短，越傾向于風(fēng)險尋求2中介分析表明，自我效能感在特質(zhì)性焦慮對風(fēng)險決策的影響中起著部分中介的作用。這些結(jié)果表明，特質(zhì)性焦慮對風(fēng)險決策具有顯著的影響，并且自我效能感在其中具有中介作用。研究二采用靜息態(tài)功能性磁共振技術(shù)（RESTINGSTATEFMRI）技術(shù)，考察了特質(zhì)性焦慮影響風(fēng)險決策的神經(jīng)基礎(chǔ)及運行機制。結(jié)果發(fā)現(xiàn)1額下回與左側(cè)扣帶后回之間的功能連接IFGLPCC與特質(zhì)性焦慮得分顯著相關(guān)2額下回與左側(cè)扣帶后回之間的功能連接IFGLPCC、右側(cè)腦島和左側(cè)扣帶后回之間的功能連接（RINSULARLPCC）、扣帶前回和額下回之間的功能連接ACCIFG與風(fēng)險決策顯著相關(guān)3額下回與左側(cè)扣帶后回之間的功能連接IFGLPCC在特質(zhì)性焦慮對風(fēng)險決策的影響中起著顯著的中介作用。這些結(jié)果表明，額下回與左側(cè)扣帶后回之間的功能連接IFGLPCC可能是特質(zhì)性焦慮影響風(fēng)險決策的神經(jīng)基礎(chǔ)。綜合而言，研究發(fā)現(xiàn)1特質(zhì)性焦慮對風(fēng)險決策具有重要影響高特質(zhì)性焦慮個體傾向于風(fēng)險規(guī)避，低特質(zhì)性焦慮個體傾向于風(fēng)險尋求，并且特質(zhì)性焦慮通過自我效能感間接的影響風(fēng)險決策2特質(zhì)性焦慮通過額下回與左側(cè)扣帶后回之間的功能連接IFGLPCC對風(fēng)險決策產(chǎn)生間接影響，額下回與左側(cè)扣帶后回之間的功能連接IFGLPCC可能是特質(zhì)性焦慮影響風(fēng)險決策的神經(jīng)基礎(chǔ)。本研究從認(rèn)知加工和神經(jīng)機制的出發(fā)，初步探討了特質(zhì)性焦慮對風(fēng)險決策的影響，這些結(jié)果從特質(zhì)性角度加深對于風(fēng)險決策的認(rèn)知機制與神經(jīng)基礎(chǔ)的理解，因而具有重要的科學(xué)價值，對于臨床實踐也具有一定的指導(dǎo)意義。

簡介：點擊查看更多C3d對分泌型柯薩奇病毒B組3型VP1 DNA疫苗的免疫增強作用.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：點擊查看更多手術(shù)室護士對術(shù)前訪視、術(shù)后隨訪和術(shù)后轉(zhuǎn)運認(rèn)知情況調(diào)查.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：瀘州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文EB病毒、幽門螺桿菌感染與胃癌的關(guān)系及EB病毒致胃癌機制的研究姓名張文杰申請學(xué)位級別碩士專業(yè)內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師唐世孝20090501GASTRICCARCINOMA，EBVNGC在年齡、腫瘤分化程度方面差異無顯著性，P005，而在性別方面有顯著差異X2393，PO05，但在腫瘤分化程度方面HPYLORICAGA、VACA基因陽性和陰性有統(tǒng)計學(xué)差異P001。⑥相關(guān)性分析表明EBV感染與CAGA呈正相關(guān)PO0064，R028707，與VACA無相關(guān)性PO1822，R014270。QEBV對體外培養(yǎng)的胃上皮細(xì)胞SGC7901細(xì)胞株的增值有明顯促進作用。同時對細(xì)胞凋亡有抑制作用，且兩者均具有濃度依賴性。結(jié)論OEBV感染與胃癌的發(fā)生發(fā)展有一定相關(guān)性，EBVAGC好發(fā)于男性，EBV感染與慢性萎縮胃炎一胃潰瘍一腸化生一胃癌演變過程呈正相關(guān)。但EBV感染與胃癌病人年齡、腫瘤分化程度無明顯相關(guān)性。②HPYLORICAGA基因和VACA基因陽性菌株感染與胃癌的發(fā)生密切相關(guān)，且與胃癌的分化程度相關(guān)，但與胃癌病人性別、年齡無明顯相關(guān)性。③胃癌發(fā)生中EBV感染和HPYLORICAGA基型感染呈正相關(guān)，與VACA基因型感染無明顯相關(guān)性。鴦EBV對體外培養(yǎng)的胃上皮細(xì)胞的增值有明顯促進作用，并對細(xì)胞凋亡有抑制作用，且兩者均具有濃度依賴性。

簡介：ATHESISDISSERTATIONSUBMITTEDTOZHENGZHOUUNIVERSITYFORTHEDEGREEOFDOCTORCONSTRUCTIONOFLENTIVIRALVECTORTARGETINGRHOCANDITSIMPACTSONBIOLOGICALBEHAVIORANDDRUGRESISTANCETODTICOFMELANOMACELLSBYQIYINGWANGSUPERVISORLINBOLIUDEPARTMENTOFPLASTICSURGERYTHEFIRSTAFFILIATEDHOSPITALOFZHENGZHOUUNIVERSITYMAY2011原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨立進行研究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的科研成果。對本文的研究作出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者{盛哆日期CⅫJ年‘月F日學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的論文及相關(guān)的職務(wù)作品，知識產(chǎn)權(quán)歸屬鄭州大學(xué)。根據(jù)鄭州大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留或向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權(quán)鄭州大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或者其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。本人離校后發(fā)表、使用學(xué)位論文或與該學(xué)位論文直接相關(guān)的學(xué)術(shù)論文或成果時，第一署名單位仍然為鄭州大學(xué)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。學(xué)位論文作者{堪毫日期幽『『年F月F日

簡介：目的分析乙肝病毒HEPATITISBVIRUS，HBV逆轉(zhuǎn)錄酶區(qū)RTI233V變異的演變規(guī)律及其與阿德福韋酯ADV耐藥的相關(guān)性。方法分析了9830例慢性HBV感染者血清樣本中HBVRTI233V變異的檢出率。選擇其中2例代表性患者的動態(tài)收集血清樣本，擴增HBVRT基因并克隆測序（＞20個克隆樣本）以觀察RTI233V變異的演變過程。構(gòu)建PTRIEXHBV11倍野生株WT、3種臨床變異株RTI233V、RTN236T、RTI233VRTN236T和定點回復(fù)突變株RTN236T復(fù)制子，瞬時轉(zhuǎn)染入HEPG2肝癌細(xì)胞，分別加入不同濃度梯度或最高濃度的拉米夫定LAM、阿德福韋酯ADV、恩替卡韋ETV和替諾福韋TDF作用，采用實時熒光定量PCR法檢測不同藥物濃度作用后細(xì)胞培養(yǎng)上清中HBVDNA水平，分析變異病毒復(fù)制力與表型耐藥變化特點。結(jié)果9830例慢乙肝患者血清樣本中共檢出RTI233V位點變異28例，檢出率為028％，其中RTI233V單獨變異19例，與RTN236T等經(jīng)典耐藥變異聯(lián)合出現(xiàn)9例。該變異的檢出患者均有ADV治療史，其中16例571％接受ADV單藥治療6個月以上，12例429％接受包括ADV的多藥序貫聯(lián)合治療1年以上。患者1相對病毒復(fù)制力與表型耐藥分析顯示，RTI233V變異株的復(fù)制力與野生株接近982％，RTN236T變異株則較野生株顯著降低554％RTI233VRTN236T變異株的相對病毒復(fù)制力為野生株的1004％，表明RTI233V變異可明顯恢復(fù)RTN236T變異株受損的復(fù)制力RTN236T、RTI233VRTN236T和RTI233V變異株對ADV的敏感性分別為野生株的1682，1528和1157，RTN236T和RTI233VRTN236T變異株對ADV耐藥，而RTI233V變異株對ADV仍然敏感，與RTN236T聯(lián)合變異對ADV耐藥性的影響不大?；颊?RTI233V變異株的相對病毒復(fù)制力為野生株的1025％對ADV的敏感性為野生株的1076。RTI233V變異株對ADV及LAM、ETV和TDF均敏感。ADV對臨床變異株RTI233VRTN236T和定點回復(fù)突變株RTN236TLAB的抑制率相似，進一步證實RTI233V變異株對ADV耐藥性影響不大。結(jié)論RTI233V位點變異與ADV應(yīng)答不佳相關(guān)，但不直接降低病毒對ADV的敏感程度，可以恢復(fù)經(jīng)典ADV耐藥病毒株的復(fù)制力，是一種復(fù)制力補償變異。

簡介：目的通過分析712歲兒童語義加工事件相關(guān)電位ERP特征波形變化，探討不同年齡兒童漢字語義加工的腦機制。同時通過分析多動癥兒童和正常兒童ERP波形的變化以探討多動癥兒童伴有語言障礙的神經(jīng)電生理機制。方法選擇本市一所小學(xué)學(xué)生120名，按年齡分成6組，每組20名，采用漢字為視覺刺激內(nèi)容，進行ERP檢測并用BSEA軟件分析；選擇門診被診斷為多動癥伴有語言障礙兒童30名參與認(rèn)知檢測實驗，并利用ERP紀(jì)錄并用BSEA軟件提取相關(guān)波形和數(shù)據(jù)，根據(jù)年齡匹配的原則從以上120名兒童中選取30名作為對照組，進行統(tǒng)計分析。結(jié)果第一部分①行為學(xué)結(jié)果，不相關(guān)反應(yīng)時大于相關(guān)的反虛時除7歲組外，比較有統(tǒng)計學(xué)差異P005②各組兒童的波形成分基本一致包括N1，P2，N2，P3；③不相關(guān)、假字的N400、P300的波幅均高于相關(guān)，比較有明顯統(tǒng)計學(xué)差異；④7歲、8歲與9歲之間相關(guān)CZ的N400波幅之間無統(tǒng)計學(xué)意義，而7歲、9歲與12歲之間有顯著統(tǒng)計學(xué)差異。不相關(guān)、假字的7歲與9歲之間有顯著統(tǒng)計學(xué)差異，同時9歲和12歲之間也有顯著統(tǒng)計學(xué)差異。第二部分①多動癥和正常兒童的波形成分基本一致，包括N1，P2，N2，P3，②多動癥兒童相關(guān)的N400波幅均高于正常兒童，比較有統(tǒng)計學(xué)差異P001，不相關(guān)刺激條件下多動癥兒童P300波幅低于正常兒童，假字刺激條件下各個組分均未見差異結(jié)論研究提示N400會隨著兒童語言發(fā)展其波幅發(fā)生相應(yīng)變化，即先升高后降低，9歲時波幅最高。這種變化能夠反映712歲兒童語義加工發(fā)展的規(guī)律，說明兒童語言發(fā)展是不連續(xù)的；多動癥伴有語言障礙兒童其ERP波的變化主要發(fā)生在N400、P300的波幅上，這種變化提示主多動癥兒童語義啟動效應(yīng)較正常兒童差，并且ADHD患兒的語言加工執(zhí)行存在困難。

簡介：目的把乙型肝炎病毒（HEPATITISBVIRUS，HBV）改造為攜帶外源基因的復(fù)制型載體，可視化的觀察HBV的表達與復(fù)制。方法1、利用PCR和分子克隆技術(shù)構(gòu)建表達切開綠色熒光蛋白GREENFLUESCENTPROTEIN，GFP110片段的質(zhì)粒PSUCMVGFP110構(gòu)建表達GFP11片段的載體質(zhì)粒PCHGFP11CEPCHGFP11BSDR和PCHGFP11S2。2、質(zhì)粒PSUCMVGFP110分別與表達GFP11的載體質(zhì)粒PCHGFP11CE，PCHGFP11BSDR和PCHGFP11S2共轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞系HEPG2細(xì)胞，觀察GFP表達的強度和特點。3、載體質(zhì)粒PCHGFP11CE，PCHGFP11BSDR和PCHGFP11S2分別轉(zhuǎn)染HEPG2細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后第五天提取細(xì)胞裂解液中的DNA，用SOUTHERNBLOT檢測HBV復(fù)制水平。4、載體質(zhì)粒PCHGFP11CE及表達野生型HBV的對照質(zhì)粒PCH93093分別轉(zhuǎn)染HEPG2細(xì)胞，細(xì)胞裂解液直接進行瓊脂糖凝膠電泳，轉(zhuǎn)PVDF膜，應(yīng)用MC312PO抗體檢測重組HBV核心顆粒的形成。5、質(zhì)粒PSUCMVGFP110與載體質(zhì)粒PCHGFP11CE共轉(zhuǎn)染HEPG2細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后24H加抑制核心蛋白聚合的藥物BAY414109，對照組加相同濃度無活性的BAY414842，加藥后24H在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞內(nèi)熒光變化。6、用本實驗室構(gòu)建保存的表達發(fā)卡狀小干擾RNASHRNA的質(zhì)粒PBSSHHBV6共轉(zhuǎn)染HEPG2細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后48H在熒光顯微鏡下觀察各組細(xì)胞內(nèi)熒光變化。結(jié)果第一部分SPLITGFP11片段與HBV核心蛋白N端形成融合蛋白的研究1、重組質(zhì)粒PCHGFP11CE的構(gòu)建以表達野生型HBV的質(zhì)粒PCH93093作為載體，該載體包含105倍的HBV全基因組，基因組前置入了一個CMV啟動子，替代HBV自身的C基因啟動子，用于驅(qū)動前基因組RNA的轉(zhuǎn)錄。在HBV核心蛋白N端插入GFP11序列。GFP11序列為CGGGACCACATGGTGCTGCACGAGTACGTGAACGCCGCCGGCATCACA，插入到HBV核心蛋白N端第9位核苷酸之后，再以一個親水短肽GGCGACGGCGGCAGCGGCGGCGGATCCGGT連接，形成GFP11CE融合蛋白，所構(gòu)建的PCHGFP11CE載體質(zhì)粒經(jīng)酶切鑒定及序列測定證實。2、重組HBV的熒光表達質(zhì)粒PSUCMVGFP110與載體質(zhì)粒PCHGFP11CE共轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞系HEPG2細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后48H在熒光顯微鏡下可觀察到細(xì)胞內(nèi)很強的綠色熒光表達，以細(xì)胞核為主，這一結(jié)果與公認(rèn)的HBV核心蛋白的正常分布一致。3、重組HBV核心蛋白顆粒的形成載體質(zhì)粒PCHGFP11CE及表達野生型HBV的對照質(zhì)粒PCH93093分別轉(zhuǎn)染HEPG2細(xì)胞，細(xì)胞裂解液直接進行瓊脂糖凝膠電泳，轉(zhuǎn)PVDF膜，應(yīng)用MC312PO抗體檢測到重組HBV核心顆粒的形成，二者比較在相近的電泳位置，說明GFP11CE融合蛋白能夠形成完整的核心蛋白顆粒。4、重組HBV的復(fù)制能力載體質(zhì)粒PCHGFP11CE以表達野生型HBV的對照質(zhì)粒PCH93093分別轉(zhuǎn)染HEPG2細(xì)胞，提取細(xì)胞裂解液中的DNA，用SOUTHERNBLOT檢測HBV復(fù)制水平，該載體未檢測到HBV復(fù)制中間體，而對照質(zhì)粒PCH93093可檢測到HBVDNA。5、熒光示蹤觀察BAY414109對HBV核心蛋白的影響質(zhì)粒PSUCMVGFP110與載體質(zhì)粒PCHGFP11CE共轉(zhuǎn)染HEPG2細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后24H加入1ΜM的抑制HBV核心蛋白聚合的藥物BAY414109，對照組加入相同濃度無活性的BAY414842，加藥后24H在熒光顯微鏡下觀察熒光的變化，加用BAY414109組熒光主要在核膜表達，對照組熒光無變化，仍主要在胞核表達。6、小干擾RNA抑制作用用本實驗室構(gòu)建保存的表達發(fā)卡狀小干擾RNASHRNA的質(zhì)粒PBSSHHBV6與質(zhì)粒PSUCMVGFP110和載體質(zhì)粒PCHGFP11CE共轉(zhuǎn)染HEPG2細(xì)胞，加用PBSSHHBV6組熒光強度明顯減弱，帶有熒光的細(xì)胞數(shù)也顯著減少。第二部分SPLITGFP11片段與殺稻瘟菌素抗性基因的融合蛋白在HBV核心蛋白與P蛋白之間表達的研究1、重組質(zhì)粒PCHGFP11BSDR的構(gòu)建以本實驗室前期構(gòu)建的質(zhì)粒PCHBSDR作為載體，將GFP11與BSDR形成融合蛋白插入HBV核心蛋白與P蛋白之間，GFP及LINKER序列同第一部分。2、重組HBV的熒光表達質(zhì)粒PSUCMVGFP110與載體質(zhì)粒PCHGFP11BSDR共轉(zhuǎn)染HEPG2細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后48H在熒光顯微鏡下可觀察到細(xì)胞內(nèi)很強的綠色熒光，胞漿和胞核均等表達。3、重組HBV的復(fù)制能力載體質(zhì)粒PCHGFP11BSDR以表達野生型HBV的質(zhì)粒PCH93093和前期構(gòu)建的載體質(zhì)粒PCHBSDR為對照分別轉(zhuǎn)染HEPG2細(xì)胞，提取細(xì)胞裂解液中的DNA，用SOUTHERNBLOT檢測HBV復(fù)制水平。該載體PCHGFP11BSDR中HBVDNA的條帶分布模式均與PCH93093轉(zhuǎn)染后相似。圖像經(jīng)計算機軟件定量分析顯示，在總DNA層面，PCHBSDR轉(zhuǎn)染組HBVDNA的量相當(dāng)于PCH93093的4045％，PCHGFP11BSDR的HBVDNA量稍減，但仍可達PCH93093的20％。4、小干擾RNA抑制作用用質(zhì)粒PBSSHHBV6與質(zhì)粒PSUCMVGFP110和載體質(zhì)粒PCHGFP11BSDR共轉(zhuǎn)染HEPG2細(xì)胞，加用PBSSHHBV6組熒光強度明顯減弱，帶有熒光的細(xì)胞數(shù)顯著減少。第三部分SPLITGFP11與HBV前S2蛋白形成融合蛋白的研究1、重組質(zhì)粒PCHGFP11S2的構(gòu)建以表達野生型HBV的質(zhì)粒PCH93093作為載體，在HBV前S2區(qū)插入GFP11序列，GFP11及LINKER序列同第一部分，將前S1，S2的起始密碼突變?yōu)锳CG，GFP11與前S2形成融合蛋白，GFP11在HBV前S2起始位置。所構(gòu)建的PCHGFP11S2載體質(zhì)粒經(jīng)酶切鑒定及序列測定證實。2、重組HBV的熒光表達質(zhì)粒PSUCMVGFP110與載體質(zhì)粒PCHGFP11S2共轉(zhuǎn)染HEPG2細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后48H，在熒光顯微鏡下可觀察到細(xì)胞內(nèi)較弱的綠色熒光，熒光主要在細(xì)胞漿中散在分布。3、重組HBV的復(fù)制能力載體質(zhì)粒PCHGFP11S2及表達野生型HBV的對照質(zhì)粒PCH93093分別轉(zhuǎn)染HEPG2細(xì)胞，提取細(xì)胞裂解液中的DNA，用SOUTHERNBLOT檢測HBV復(fù)制水平。該載體中HBVDNA的條帶分布模式均與PCH93093轉(zhuǎn)染后相似。圖像經(jīng)計算機軟件定量分析顯示，在總DNA層面，PCHGFP11S2轉(zhuǎn)染組HBVDNA的量相當(dāng)于PCH93093的95％，結(jié)果提示該HBV載體幾乎不影響HBV的復(fù)制。4、小干擾RNA抑制作用用本實驗室構(gòu)建保存的表達發(fā)卡狀小干擾RNASHRNA的質(zhì)粒PBSSHHBV6與質(zhì)粒PSUCMVGFP110和載體質(zhì)粒PCHGFP11S2共轉(zhuǎn)染HEPG2細(xì)胞，加用PBSSHHBV6組熒光強度明顯減弱，帶有熒光的細(xì)胞數(shù)也顯著減少。結(jié)論利用綠色熒光蛋白熒光互補技術(shù)，把48BPGFP11小片段插入HBV基因組不同區(qū)域，構(gòu)建了三種重組HBV載體1、在HBV核心蛋白N端插入GFP11，形成融合蛋白，表達熒光強度高，能夠形成核心蛋白顆粒，但失去了復(fù)制能力?？捎糜谟^察HBV核心蛋白的聚合及研究抑制HBVMRNA的藥物。2、在HBV核心蛋白與P蛋白之間插入GFP11BSDR融合蛋白，表達熒光強度高，保留約20％的復(fù)制能力。可用于觀察抑制HBV復(fù)制的藥物。3、在HBV前S2區(qū)插入GFP11并與之融合表達，表達熒光強度較弱，但保留約95％的復(fù)制能力?？捎糜谟^察抑制HBV復(fù)制的藥物。