慢病毒介導的siRNA沉默ADAMTS-5在體外培養(yǎng)的大鼠軟骨細胞中的作用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:構建ADAMTS-5siRNA慢病毒載體,研究慢病毒載體介導的siRNA對大鼠離體軟骨細胞中ADAMTS-5基因表達的影響。
　　方法:針對ADAMTS-5基因RNAi有效靶點構建大鼠pGCSIL-GFP-ADAMTS-5siRNA表達質粒,使用慢病毒包裝系統(tǒng),在293T細胞中進行包裝生產(chǎn)含ADAMTS-5siRNA的慢病毒顆粒,然后轉導入大鼠軟骨細胞。通過real-timePCR和Westernblot方法檢測轉導后軟骨細

2、胞ADAMTS-5基因mRNA及蛋白表達水平的變化。
　　結果:成功包裝大鼠含ADAMTS-5siRNA慢病毒顆粒。ADAMTS-5siRNA能順利轉入軟骨細胞,轉染率為80％;從Real-timePCR結果可以看出,大鼠關節(jié)軟骨細胞中ADAMTS-5mRNA的表達量,干擾組明顯低于陰性對照組,差異有顯著性意義(P<0.05),Westernblot結果顯示,ADAMTS-5蛋白表達量,干擾組低于陰性對照組,差異有顯著性意義(P<

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