大鼠肝再生相關(guān)lncRNA對大鼠肝細胞株BRL-3A增殖的作用研究.pdf

1、近些年來，研究證明lncRNA能夠調(diào)控多種生理和病理進程，包括對大鼠肝再生的調(diào)控。但是lncRNA對肝再生的調(diào)控機制還不清楚。為了了解lncRNA是如何調(diào)控肝再生，本研究采用高通量測序、RT-PCR檢測大鼠2/3肝切除誘導(dǎo)的肝再生3個時間點肝細胞中表達有意義的lncRNA。結(jié)果表明在大鼠肝再生3個時間點肝細胞中表達變化有意義的lncRNA有770條，其中差異表達的lncRNA有28條。分析在肝再生中有意義表達的lncRNA的具體表達情況

2、，發(fā)現(xiàn)有254條表達發(fā)生上調(diào)，464條表達下調(diào)，52條表達上/下調(diào)。差異表達的28條lncRNA中13條表達上調(diào)，12條表達下調(diào)，3條表達上/下調(diào)。為了解這些差異表達的lncRNA對肝再生的調(diào)節(jié)作用，采用生物信息學(xué)方法預(yù)測其靶基因，結(jié)果表明lncRNA的共表達(TRANS作用)基因中表達差異的465條。lncRNA的調(diào)控(CIS作用)基因差異表達的10條。為進一步篩選出待研究的lncRNA及其在肝再生中的作用，用DESeq，結(jié)合GO和K

3、EGG信息分析基因功能發(fā)現(xiàn)基因在細胞中具有多種作用。用Ingenuity中的Ingenuity Pathway Analysis(IPA)檢測大鼠肝再生不同時間點差異表達的基因相應(yīng)的蛋白質(zhì)在細胞中作用，結(jié)果顯示相關(guān)基因在細胞生長、增殖、分化、細胞通訊、信號傳導(dǎo)、分子運輸、細胞增殖、作為信號分子等方面具有一定的調(diào)控作用。IPA分析信號通路發(fā)現(xiàn)差異表達lncRNA的靶基因主要參與的信號通路有ILK通路、ERK/MAPK通路、SAPK/JNK

4、 Signaling通路等。
　　本文從差異表達lncRNA中篩選其中的兩個并研究其對肝細胞增殖的調(diào)控作用。高通量測序結(jié)果表明lncRNA TCONS_00027980和TCONS_00042303在肝再生不同時間點表達水平顯著變化，RT-PCR檢測不同時間點再生肝組織中兩種lncRNA的RNA表達水平，實驗結(jié)果表明高通量測序結(jié)果是可信的。本文首先用干涉技術(shù)降低lncRNA在大鼠BRL-3A細胞中的表達水平，MTT法檢測BRL-3

5、A細胞的活性，流式細胞術(shù)檢測BRL-3A增殖情況的變化，RT-PCR和Western-blot用來檢測與增殖相關(guān)基因的表達情況。檢測結(jié)果表明MTT法檢測表明實驗組比對照組細胞活性增加(P＜0.05);流式細胞術(shù)實驗檢測顯示與對照組相比，實驗組的S+G2/M期細胞數(shù)在一定程度上增加了(P＜0.05);而real-time PCR(RT-PCR)檢測mRNA表達水平，結(jié)果表明實驗組與對照組相比，細胞增殖相關(guān)基因MYC、CCNA2、CCND1