大鼠再生肝UCP2表達與肝細胞增殖、功能的相關性研究.pdf

1、目的：肝臟具有很強的再生能力。大鼠肝切除70﹪后，殘余肝在數(shù)小時內(nèi)啟動再生過程，并于術后7天左右的時間完全修復缺失肝組織。肝再生是一個非常復雜的過程，目前對再生機制的研究仍不十分清楚。解偶聯(lián)蛋白2(uncouplingprotein 2，UCP2)是線粒體內(nèi)膜上的質(zhì)子通道，廣泛分布于嚙齒類動物各組織器官中。UCP2被激活時能引發(fā)質(zhì)子漏，質(zhì)子經(jīng)UCP2滲漏回基質(zhì)，使氧化磷酸化部分解耦聯(lián)；適時降低線粒體膜電位，減少過量ROS的產(chǎn)生。因此，U

2、CP2對細胞能量代謝及ROS產(chǎn)生具有調(diào)節(jié)作用。已知正常肝實質(zhì)細胞不表達UCP2，但肝部分切除或肝毒劑損傷肝臟后導致肝再生時，再生肝實質(zhì)細胞UCP2表達卻顯著增加。UCP2在再生肝內(nèi)高表達有何意義目前還不十分清楚。 本研究通過制備大鼠肝再生模型，動態(tài)監(jiān)測肝再生過程中UCP2的表達：探討UCP2表達與肝細胞增殖、肝細胞功能的相關性，能進一步認識肝臟生理活動的規(guī)律和肝再生的調(diào)控機制；為臨床肝損傷、部分切除甚至移植等肝損傷與再生的應用提

3、供重要的實驗依據(jù)。 方法：本研究選用健康雄性Wistar大鼠，體重180±20g，隨機分為假手術組(SH)和肝切組(PH)，肝切組大鼠根據(jù)術后的不同時間點又分為24h，48h，72h，96h四組，每組5只。按higgins和Anderson方法，將禁食12 h后大鼠行700﹪肝部分切除術，術后自由攝食飲水。假手術組大鼠只行開腹手術，不實行肝切。手術后在上述不同時間點稱量大鼠體重；斷頭取血，血清標本4℃保存?zhèn)溆茫悍Q取新鮮肝組織0.

4、5g，用于丙二醛(malondialdehyde，MDA)、轉氨酶等生化指標檢測；并提取肝線粒體測定膜電位、UCP2表達。另取部分肝組織，經(jīng)10﹪中性福爾馬林固定，用于形態(tài)和免疫組織化學檢測。 結果： 1．再生肝的重量及組織形態(tài)學改變與假手術組比較，術后24h肝重與體重比值顯著降低(P<0.05)。48h、72h比值逐漸升高，至96h比值接近假手術組比值。HE染色顯示，假手術組肝細胞核大小正常，罕見核分裂。肝切后24h和

5、48h肝細胞增殖旺盛，核分裂顯著增加，中央靜脈擴張，其周圍細胞松散；肝切96h肝細胞重構排列成索狀，偶見核分裂，肝臟處于再生末期。 2.再生肝血清轉氨酶、白蛋白改變肝切后24h大鼠血清轉氨酶急劇增高，谷草轉氨酶(AST)達到假手術組的3倍左右(P<0.05)，而谷丙轉氨酶(ALT)達到假手術組6倍左右(P<0.001)，至72h和96h已經(jīng)恢復到假手術組水平值。肝切后24h大鼠血清白蛋白含量較假手術組明顯降低(P<0.05)，48h、7

6、2h逐漸升高，至96h恢復到假手術組水平。 3.再生肝組織內(nèi)MDA含量的改變肝切后24h時肝組織的。MDA含量升高，是假手術組7倍左右(P<0.05)，48、72h下降，96h時MDA含量仍略高于假手術組。 4.再生肝LJCP2的表達變化假手術組肝實質(zhì)細胞內(nèi)幾乎不表達UCP2蛋白。在肝切術后24h表達最多，呈強陽性，48、72h表達下降，至肝切術后96h僅有少量弱表達。Western blot檢測與免疫組化結果一致，肝切

7、術后24h時UCP2蛋白水平明顯高于假手術組(P<0.001)。肝切48小時比假手術組高(P<0.05)，肝切96小時UCP2表達接近假手術組。 5.再生肝增殖細胞核抗原的表達變化PCNA陽性細胞統(tǒng)計顯示，肝切術后24h肝細胞PCNA強陽性表達，為假手術組13倍(P<0.05)。隨后下降，肝切術后48h組為假手術組的8倍(P<0.05)，到肝切術后96h較少表達。 6.再生肝細胞線粒體膜電位和肝組織內(nèi)ATP含量的變化各時

8、間點的再生肝線粒體膜電位均高于假手術組，肝切24h組均值為211.19mv，和其它組比較均有顯著差異(P<0.001)；肝切術后48h膜電位均值為187.1mv，仍高于對照組(P<0.01)。肝切術后24h，加入GDP后線粒體膜電位明顯下降，均值從211.19mv降到181.70mv(P<0.01)。肝切術后24h肝組織內(nèi)ATP含量最低，為假手術組的25﹪(P<0.001)，48、72h逐漸增高，到肝切96h已高于假手術組(P<0.00

9、1)。 7.再生肝UCP2表達與肝細胞增殖、線粒體膜電位相關性分析將UCP2表達與肝細胞增殖、線粒體膜電位做相關性分析可知，UCP2表達和肝細胞增殖、線粒體膜電位之間存在顯著的正相關(P<0.001，r=0.946；P<0.001，r=0.813)：肝細胞增殖和線粒體膜電位之間也存在顯著的正相關(P<0.001，r=0.843)。 結論： 1．肝部分切除導致肝功能下降，隨肝的再生逐漸恢復。 2．大鼠肝再生