低強度脈沖超聲促進(jìn)大鼠牙囊細(xì)胞、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的初步研究.pdf

1、目的：探討低強度脈沖超聲（Low-IntensityPulsed Ultrasound，LIPUS）對SD大鼠牙囊細(xì)胞（rat dental follicle cells, rDFCs）、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（rat bone marrow mesenchymal stem cells, rBMSCs）成骨分化能力的影響。
　　方法：體外分離培養(yǎng)rDFCs、rBMSCs，流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面標(biāo)記物表達(dá)，茜素紅染色、油紅染色鑒定細(xì)胞多

2、向分化能力；分別于第7d、21d采用定量PCR及茜素紅染色檢測LIPUS（30mW/cm2,20min/d）對rDFCs、rBMSCs體外成骨分化的影響；然后，將rDFCs、rBMSCs分別接種無機誘導(dǎo)因子復(fù)合性組織工程支架材料進(jìn)行培養(yǎng)，于第3、5、7、9天采用掃描電鏡觀察細(xì)胞生長情況；最后，分別構(gòu)建rDFCs-支架材料及rBMSCs-支架材料的細(xì)胞三維培養(yǎng)復(fù)合體，分組進(jìn)行裸鼠皮下移植：支架材料組（空白對照組）；rDFCs+支架材料組；

3、rBMSCs+支架材料組；rDFCs+支架材料組+LIPUS組；rBMSCs+支架材料+LIPUS組；LIPUS組（30mW/cm2,20min/d）對植入部位進(jìn)行輻照，8周后收集樣本，制作組織切片，HE和Masson染色觀察組織修復(fù)狀況。
　　結(jié)果：本研究成功分離培養(yǎng)rDFCs、rBMSCs，流式細(xì)胞儀檢測提示兩種細(xì)胞均具有間充質(zhì)干細(xì)胞特征，茜素紅及油紅染色實驗提示兩種細(xì)胞具備多向分化潛能；定量PCR檢測發(fā)現(xiàn)LIPUS處理組 A

4、LP、Runx2、OSX、COL-1相對表達(dá)量較空白對照組更高；茜素紅染色結(jié)果顯示LIPUS處理組較對照組染色更明顯，鈣結(jié)節(jié)數(shù)量更多；掃描電鏡觀察結(jié)果顯示rDFCs、rBMSCs可順利粘附在材料上，隨培養(yǎng)時間的增加，支架材料表面及孔隙中可見大量細(xì)胞生長，呈梭形，可見細(xì)胞分泌細(xì)胞外基質(zhì)；HE染色結(jié)果顯示空白對照組未見明顯細(xì)胞及新生組織存在。rDFCs+支架材料組及rBMSCs+支架材料組可見少量細(xì)胞及新生類骨組織；rDFCs+支架材料組+

5、LIPUS組及rBMSCs+支架材料+LIPUS組支架材料間可見大量細(xì)胞及類骨組織；Masson染色結(jié)果顯示空白對照組未見明顯細(xì)胞及新生纖維組織，rDFCs+支架材料組及rBMSCs+支架材料組可見少量細(xì)胞、新生纖維組織及血管組織存在；rDFCs+支架材料組+LIPUS組及rBMSCs+支架材料+LIPUS組細(xì)胞數(shù)量明顯增多，可見大量新生纖維組織及血管組織。
　　結(jié)論：體外聯(lián)合LIPUS輻照可在一定程度上增強rDFCs、rBMSC