角質(zhì)細胞特異性Pten基因敲除導(dǎo)致小鼠毛囊干細胞動員加快.pdf

1、中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院碩士學位論文角質(zhì)細胞特異性Pten基因敲除導(dǎo)致小鼠毛囊干細胞動員加快姓名：王麗娟申請學位級別：碩士專業(yè)：遺傳學指導(dǎo)教師：楊曉20100605中文摘要細胞會從皮膚表面脫落，具有較強增殖能力的臨時增殖細胞其摻入核內(nèi)的BrdU會因為反復(fù)增殖而被逐漸稀釋，最終呈現(xiàn)Brdu陽性的細胞則是細胞周期緩慢的毛囊干細胞。注射60天后檢測Brdu標記滯留細胞，發(fā)現(xiàn)在對照和P絕，l基因敲除小鼠的毛囊隆突都能存在很多Brdu標記滯留

2、細胞。而注射77天后再次檢測Brdu標記滯留細胞，結(jié)果顯示在對照小鼠的毛囊隆突存在BrdU標記滯留細胞，而P地，l基因敲除小鼠的毛囊和整個表皮的細胞中都基本檢測不到BrdU標記滯留細胞。說明P紀，l基因敲除會促進毛囊干細胞動員。利用CD34和Ki67抗體熒光雙標記檢測，發(fā)現(xiàn)對照小鼠毛囊中表達CD34的細胞基本不表達Ki67，而P把以基因敲除小鼠毛囊CD34陽性的細胞其中一些是Ki67陽性的。這就直接證明了P砌基因敲除后小鼠毛囊干細胞動員

3、確實加快。我們利用干細胞克隆形成實驗在體外進一步證明了R翻基因敲除小鼠的毛囊干細胞動員加快。將尸紀以基因敲除小鼠和對照小鼠皮膚中原代分離的相同數(shù)目的角質(zhì)細胞在有小鼠胚胎成纖維細胞做滋養(yǎng)層的體系中培養(yǎng)，對克隆形成的速度和大小進行統(tǒng)計和分析。發(fā)現(xiàn)來自R繃基因敲除小鼠的細胞克隆形成速度快，但小克隆較多。其中細胞數(shù)在32200的小克隆約占全部克隆的63％，而對照小鼠是4l％。細胞數(shù)大于1000的大克隆只占全部克隆的137％，而對照小鼠是18％。