BNCT治療人黑色素瘤的初步探討.pdf

1、研究目的：探討硼中子俘獲療法（boron neutron capture therapy,BNCT）對人黑色素瘤A375細胞的殺傷機制，同時建立人腦黑色素瘤細胞裸小鼠動物模型，為進行硼中子俘獲療法體內(nèi)動物實驗研究奠定基礎(chǔ)。
　　研究方法：將處于對數(shù)生長期的A375細胞株進行實驗分組，設(shè)：
　　（1）對照組，A375細胞不進行任何照射。
　　（2）γ射線照射組，為60CO照射處于對數(shù)生長期的A375細胞，應(yīng)用劑量分別為2

2、Gy和4Gy。
　　（3）醫(yī)院中子照射器（In-Hospital Neutron Irradiator,IHNI-1）組，為將處于對數(shù)生長期的A375細胞直接用IHNI-1產(chǎn)生的中子進行照射，應(yīng)用劑量分別為2Gy和4Gy。
　?。?）BNCT組，為將處于對數(shù)生長期的A375細胞放入5mmol/l的含硼化合物二羥基苯丙氨酸硼（boronophenylalanine,BPA）果糖復(fù)合物中，孵育后用IHNI-1產(chǎn)生的中子進行照射，

3、應(yīng)用劑量分別為2Gy和4Gy。
　　本實驗應(yīng)用感應(yīng)耦合等離子體原子發(fā)射光譜儀（ICP-AES）檢測人黑色素瘤細胞株A375吸收BPA的情況；采用IHNI-1對含硼（boron-10,10B） A375細胞進行照射；利用MTT法檢測A375細胞增殖率，流式細胞分析技術(shù)檢測A375細胞凋亡情況，Western blot檢測A375胞質(zhì)內(nèi)細胞色素c和caspase-9的水平；最后將處于對數(shù)生長期的人黑色素瘤細胞A375細胞株接種于BAL

4、B/c裸小鼠顱內(nèi)，常規(guī)HE和免疫組織化學(xué)染色，然后用普通光鏡觀察移植瘤細胞的形態(tài)特征。
　　結(jié)果：
　?。?）黑色素瘤A375細胞株吸收10B濃度24小時至最高，可達2.884±0.148μg/107細胞，超過24小時10B濃度出現(xiàn)開始下降的趨勢。
　?。?）單純BNCT對黑色素瘤A375細胞的殺傷作用明顯強于γ射線照射。
　?。?）對富含10B的黑色素瘤A375細胞，經(jīng)BNCT后其生存比例和增殖率較其他各組顯著

5、下降。同時發(fā)現(xiàn)黑色素瘤細胞胞質(zhì)內(nèi)細胞色素c水平明顯上升，caspase-9水平顯著增加。
　?。?）A375細胞可以成功種植于BALB/c裸小鼠顱內(nèi)，對腦內(nèi)模型常規(guī)HE檢查均見有腫瘤生長，成瘤率達100%，成功建立了黑色素瘤顱內(nèi)裸小鼠模型。
　　結(jié)論：BNCT對人黑素瘤細胞株A375具有明顯的增殖抑制及誘導(dǎo)凋亡的作用；BNCT殺傷黑色素瘤細胞的機制可能通過線粒體途徑誘導(dǎo)細胞凋亡；人腦黑色素瘤細胞動物模型的建立可以為以后BNC