TNF-α對乳鼠心室肌細(xì)胞Cx43表達(dá)的影響.pdf

1、第一部分TNF-α對乳鼠心肌細(xì)胞Cx43表達(dá)的作用
　　目的：探討不同TNF-α濃度作用下,乳鼠心肌細(xì)胞(NRCM)Cx43表達(dá)的變化情況及特點。
　　方法：培養(yǎng)原代乳鼠心肌細(xì)胞。將培養(yǎng)的原代乳鼠心肌細(xì)胞隨機(jī)分為4組:TNF-α干預(yù)組、TNF-α+螯合劑組、正常對照組、螯合劑組。原代心肌細(xì)胞培養(yǎng)48h后,TNF-α干預(yù)組細(xì)胞與不同濃度的TNF-α共同孵育。螯合劑組細(xì)胞除加TNF-α處理外,加用RhTNFR:Fc預(yù)先處理,正常

2、組不做任何處理。24h后,采用WesternBlot法和激光共聚焦顯微鏡共同檢測Cx43的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：與正常組對比,在TNF-α干預(yù)組,隨著TNF-α濃度的增加,磷酸化的Cx43(P-Cx43)表達(dá)減少(p<0.05),非磷酸化的Cx43(NP-Cx43)含量增加(p<0.05);與TNF-α干預(yù)組比,TNF-α+螯合劑組磷酸化Cx43表達(dá)減少的幅度降低(p<0.05),非磷酸化Cx43表達(dá)增加的幅度也減少(p<0.05

3、),這兩組之間的差別具有統(tǒng)計學(xué)意義。單加螯合劑組Cx43表達(dá)無明顯改變。激光共聚焦的結(jié)果與westernblot的結(jié)果一致。
　　結(jié)論：在TNF-α的作用下,乳鼠心室肌細(xì)胞Cx43的表達(dá)發(fā)生了變化,即磷酸化的Cx43表達(dá)減少,非磷酸化的Cx43表達(dá)增多。TNF-α螯合劑可以部分阻斷這一作用。
　　第二部分TNF-α調(diào)節(jié)Cx43表達(dá)的調(diào)控機(jī)制
　　目的：研究TNF-α調(diào)節(jié)Cx43的表達(dá)的作用機(jī)制
　　方法：培養(yǎng)乳鼠

4、原代心肌細(xì)胞。將培養(yǎng)的乳鼠原代心肌細(xì)胞隨機(jī)分為四組:正常對照組、TNF-α干預(yù)組、TNF-α+P38MAP信號阻斷劑組(SB203580)、P38MAP信號阻斷劑(SB203580)組。乳鼠原代心肌細(xì)胞培養(yǎng)48h后,依據(jù)上述分組做相應(yīng)處理。24h后,采用WesternBlot法和激光共聚焦顯微鏡共同檢測Cx43的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：與TNF-α干預(yù)組相比,TNF-α+P38MAP信號阻斷劑組磷酸化Cx43表達(dá)減少的幅度有所降低(